[发明专利]使用percoll提高精子流式细胞仪分离效率的应用

说明书

一种使用percoll提高精子流式细胞仪分离效率的应用，属于动物繁殖技术领域，用于提高精子流式细胞分离效率。本发明有优点是：percoll法可以显著提升精子活力去除死精，经处理过的精子可以有效提升精子流式细胞分离效率。

技术领域

本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及使用percoll试剂(聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒混悬液)处理精液，去除死精后的精液，提高精子流式细胞仪分离效率的应用。

背景技术

对精子进行有目的的选择——X、Y精子的分离，是实现性别控制的最理想途径。性别控制不仅可以增强选种强度、加快育种进程还可以充分发挥受性别影响性状的最大经济效益。流式细胞仪的问世使性控分离技术商业化成为可能。目前流式细胞分离技术已经得到大幅的提升，但分离速度仍然无法完全满足市场需求，同时也是性控冻精售价昂贵的主要原因之一。分离机的分离速度除了机器本身设置外，主要是由分离精液的死精率决定的，死精率越高分离速度越低，生产的性控冻精越少。percoll法是使用percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的精子分离纯化。percoll法已广泛应用于人工授精和体外受精、胚胎移植等辅助生殖技术领域，但还未有与流式细胞分离技术联合使用的相关研究。

发明内容

本发明解决的问题是动物精液活力低影响分离效率的问题，提供一种提高精子流式细胞分离效率的应用，使用percoll试剂处理精液，去除死精后使活力提升的精液可以进行流式细胞分离，有效的提高了精液流式分离的分离效率。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的；一种使用percoll提高精子流式细胞仪分离效率的应用，其特征在于：用于提高精子流式细胞分离效率。

一种使用percoll提高精子流式细胞仪分离效率的应用的percoll试剂的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

1、配制试剂：

(1)10×精子稀释液：

(2)精子稀释液：1ml 10×精子稀释液+9ml水

(3)90％percoll：9ml percoll+1ml 10×精子稀释液

(4)45％percoll：等体积90％percoll+等体积10×精子稀释液

(5)精子分离液：离心管先加入5ml 90％percoll，再加入5ml 45％percoll。

一种使用percoll提高精子流式细胞仪分离效率的应用，其特征在于：它包括以下步骤：

1、精液检测：使用假阴道法采精，精液为乳白色，无异味，镜下检测活力，并检测精液密度、活力；

2、取适量精液，放入精子分离液中，800g离心30min；

3、上清吸去，底部沉淀加入5ml精子稀释液，轻轻混匀，1500rpm，5min，吸去上清；

4、加入3-5ml精子稀释液，1500rpm，5min，吸去上清，精子染色后使用流式细胞仪分离。

本发明有优点和有益效果是：

percoll法可以显著提升精子活力去除死精，提升精子活力，经处理过的精子可以再使用精子流式细胞仪分离。此方法可以使活力低无法正常上机分离的原精进行正常的分离，提高原精的利用率，同时也提升了流式细胞仪的分离效率。

具体实施方式

本发明中所有试剂均购自sigma公司。

配制试剂：

(1)10×精子稀释液：