[发明专利]基于线虫表型指征的化学物毒性高通量筛检方法

说明书

本发明公开了基于线虫表型指征的化学物毒性高通量筛检方法，包括以下步骤：S1：同步化线虫，得到都处于L1期的线虫；S2：将L1期线虫培养至L4期；之后，使用K‑medium溶液将NGM培养基上的L4期线虫冲洗至离心管中；S3：将L4期线虫的K‑medium溶液加入到384孔板中；在0h时在全自动倒置荧光相差显微镜下扫描384孔板并用CCD(电荷耦合装置)记录图像，之后向384孔板的每个孔内加入染毒溶液，分别在染毒后的多个时间段使用显微镜下扫描384孔板并用CCD(电荷耦合装置)记录图像；S4：处理数据，使用MATLAB图像处理软件对所拍摄的不同时间点的图像进行数据分析，得到不同时间点的线虫的表型指征。

技术领域

本发明属于在毒理学的领域，具体涉及基于线虫表型指征的化学物毒性高通量筛检方法。

背景技术

目前，美国化学文摘社收录登记的化学物质已经超过1.3亿种，每天新增数千种。这些化学物的毒理学安全性评价，关系到人类和环境的健康和安全。传统的毒性测试主要依赖于大量的动物实验，测试周期长、通量低、费用高，难以满足大量化学物的测试需求。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于线虫表型指征的化学物毒性高通量筛检方法，解决了因为依赖于大量的动物实验导致的测试周期长、通量低、费用高和难以满足大量化学物测试需求的问题。

为了实现上述目的，本发明提供的一种基于线虫表型指征的化学物毒性高通量筛检方法，包括以下步骤：

S1：同步化线虫，得到都处于L1期的线虫；

S2：将步骤S1得到的L1期线虫培养至L4期，其中，将L1期线虫均匀滴在铺有细菌的NGM培养基上，培养30-38小时，观察线虫，当线虫的身体一侧出现月亮斑时，得到L4期线虫；之后，使用K-medium溶液将NGM培养基上的L4期线虫冲洗至离心管中；

S3：将步骤S2得到的L4期线虫的K-medium溶液加入到384孔板中；0h时在显微镜下扫描384孔板并用电荷耦合装置记录图像，对所述384孔板的每个孔采集5-15帧图像并且保存图像，之后向384孔板的每个孔内加入染毒溶液，分别在染毒后的多个时间段使用显微镜下扫描384孔板并用电荷耦合装置记录图像，所述384孔板的每个孔采集5-15帧图像并且保存图像；

S4：处理数据，使用MATLAB图像处理软件对所拍摄的不同时间点的图像进行数据分析，得到不同时间点的线虫的表型指征。

进一步地，步骤S1中线虫的同步化，包括以下步骤：

(1)选取腹内含两排虫卵的N2野生型线虫，使用s-basal溶液将线虫洗至离心管中，使线虫自然沉淀；

(2)待线虫沉淀后，弃掉离心管中的上清液，使用漂白溶液溶解离心管内沉淀的线虫，溶解后的线虫在15-25℃的温度下离心3分钟，弃掉离心管中的上清液，得到线虫的虫卵；

(3)使用s-basal溶液冲洗步骤(2)得到的线虫虫卵，其中，将虫卵置于离心管中，向离心管内加入3-8ml的s-basal溶液重悬虫卵，将装有虫卵溶液的离心管平放在摇床上，防止线虫虫卵沉淀，线虫虫卵在摇床上震荡10-12小时后，得到L1期线虫；

(4)将装有步骤(3)得到的L1期线虫的离心管平放在10-20℃的恒温培养箱里，显微镜下观察计算L1期线虫的密度，并且记录L1期线虫的密度。

优选地，步骤(2)使用漂白溶液溶解离心管内沉淀的线虫时，漩涡震荡离心管7-9分钟。

优选地，步骤(3)中摇床保持在15-25℃的恒温状态，摇床设定为80-120转每分钟。