[发明专利]甾体C1,2位脱氢药物中间体的一种生物催化制备方法

说明书

本发明提供一种利用甾酮C1,2位脱氢酶重组菌进行甾体药物中间体C1,2位生物脱氢的方法，将甾体化合物以有机溶剂溶解，投入培养好的甾酮C1,2位脱氢酶重组菌发酵液中，同时加入氢受体进行转化，转化后提取得到脱氢物。本发明所述的方法仅需要一步催化反应即可得到甾体化合物的脱氢产物，能以高底物投料浓度，获得高收率的目标产物，得到的产品纯度高，大于95％，易于分离纯化，降低了生产成本，同时减少对环境的污染，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及甾体药物中间体的制备方法，具体涉及一种甾体C1,2位脱氢药物中间体的制备方法，属于生物制药和生物化工的技术领域。

背景技术

甾体药物具有很强的抗感染、抗过敏、抗病毒和抗休克等药理作用。随着时代的不断发展，甾体药物已经成为仅次于抗生素的第二大类药物。甾体激素类药物分类：肾上腺皮质激素，包括氢化可的松，强的松等，可治疗阿狄森氏症，抗炎，抗过敏，抗休克的等；蛋白同化激素，其主要生理功能是抑制蛋白异化和促进蛋白合成，主要用于治疗蛋白质增加和合成不足引起的疾病；性激素，包括雌性激素、雄性激素和孕激素。

甾体药物母核A环C1,2位引入双键后，能成倍增加抗炎活性，目前，许多临床上常用重要甾体化合物的生产，特别是大多数具有抗炎能力的肾上腺皮质激素的生产均涉及C1,2位脱氢反应，包括泼尼松龙(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、帕拉米松(paramethasone)、倍他米松(betamethasone)、氟可龙(fluocortolone)、氟轻松(fluocinolone)、曲安西龙(triamcinolone)、甲基强的松龙(medrol)等。甾体化合物的1,2位脱氢的方法一般包括化学法和微生物发酵法。化学法脱氢一般需要使用SeO2，收率比较低，而且SeO2对环境污染很大，目前已逐渐被生物法取代。微生物发酵法脱氢，现在应用较多的菌种是节杆菌(CN101760495，CN200710060202)，虽然避免了化学法的上述缺陷，但存在着底物浓度低、转化时间长、转化率和收率都比较低、分离纯化比较困难等缺点。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种利用甾酮C1,2位脱氢酶重组菌进行甾体药物中间体C1,2位生物脱氢的方法，该方法易于制备、底物浓度高、转化率高、产率高、产品纯度高。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：将甾体化合物以溶剂溶解，投入培养好的甾酮C1,2位脱氢酶重组菌发酵液中，同时加入氢受体进行转化，转化后提取得到脱氢物。所述溶解甾体化合物的溶剂选自二甲基亚砜、DMF、丙酮、甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、异丙醇、丁醇、戊醇、己醇、庚醇、异辛醇、甲苯、乙酸丁酯中的一种或几种，且助溶剂的投料体积为反应体系总体积的10％～60％。所述的氢受体为甲萘醌、亚硫酸氢钠甲萘醌、1,4-萘醌、吩嗪硫酸甲酯中的一种或多种。所述的甾体化合物为以下几种化合物中的一种：

雄甾-4-烯-3,17-二酮；

雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮；

17β-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮；

孕甾-4-烯-3,20-二酮；

17α-羟基孕甾-4-烯-3,20-二酮；

17α,21-双羟基孕甾-4-烯-3,20-二酮；

17α,21-双羟基孕甾-4-烯-3,11,20-三酮；

11β,17α,21-三羟基孕甾-4-烯-3,20-二酮；

17α-羟基-21-氯-孕甾-4,9(11)-二烯-3,20-二酮；

17α,21-双羟基孕甾-4,9(11)-二烯-3,20-二酮-21-醋酸酯；

11β,17α,21-三羟基孕甾-4-烯-3,20-二酮-21-醋酸酯；