[发明专利]一种环状RNA hsa_circKPNA2_002及其特异性扩增引物和应用

说明书

本发明公开了一种环状RNA hsa_circKPNA2_002及其特异性扩增引物和应用，其中，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其在结直肠癌组织中高表达，可以作为筛查结直肠癌的分子标志物；本发明还提供一种用于扩增所述环状RNA的特异性扩增引物，所述特异性扩增引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；本发明还公开了所述特异性扩增引物在制备用于结直肠癌筛查的试剂盒中的应用及包括所述特异性扩增引物的试剂盒。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，尤其涉及一种用于结直肠癌诊断的环状RNA，用于所述环状RNA的特异性扩增引物及应用。

背景技术

结直肠癌是发生在下消化道的恶性肿瘤，已经成为全球性的公共健康问题。随着人民生活水平的提高，结直肠肿瘤的发病率近年来呈明显升高的趋势，其发病率和致死率均位居前列，严重影响人们的生活质量。早期诊断、早期治疗能够大大减少结直肠癌恶化的进一步发生，随着分子水平的发展以及对结直肠癌发生、发展、治疗相关机制的进一步研究，对靶向诊断和靶向治疗分子标志物的筛选和研究成为结直肠癌研究最受关注的领域之一。

环状RNA(Circular RNA，circRNA)是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子，主要由前体RNA(pre-mRNA)通过可变剪切加工产生。circRNA大多数定位于细胞质中，少数定位于细胞核内，大多数由外显子形成。circRNA不易被核酸外切酶降解，与线性RNA相比能更稳定地存在于生物体内，其在不同的物种中具有保守性，同时在不同组织及发育阶段具有表达特异性，大多数circRNA在不同的物种间含量丰富且都具有组织特异性，在人体组织、唾液、血液和外泌体中都有稳定表达，这使得circRNA成为肿瘤患者诊断、治疗和预后追踪的理想生物标志物。

近年来，关于circRNA与肿瘤之间的关系研究已有很多报道，已经明确circRNA具有调节肿瘤细胞增殖、凋亡、血管形成、代谢以及耐药等功能。Zhang等通过对不同泌乳时期的两组老鼠的乳腺组织进行circRNA芯片检测，发现circRNA在不同泌乳期老鼠乳腺组织中的表达有很大差异，两个时期检测到circRNA种类大多数不同。因此，circRNA可能是结直肠癌精准诊疗的新靶点，发现和筛选结直肠癌相关的circRNA标志物，对早期防治结直肠癌具有重要的意义和价值。

发明内容

本申请的目的在于提供以下几个方面：

第一方面，本申请提供一种环状RNA，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，起始两个核苷酸与最末两个核苷酸为成环结合位点。

所述环状RNA在circ-RNA数据库circBank中的全称为hsa_circKPNA2_002，简称circKPNA2_002，在circBase数据库中的编号为hsa_circ_0045475。

图1为所述环状RNA的基因结构图，如图1所示，所述环状RNA hsa_circKPNA2_002的序列全长325bp，位于人类的17号染色体正义链上66033225-66036882之间，由KPNA2基因外显子(exon)2-4区剪切环化而成，CDS表示该环状RNA来自编码区。F和R分别代表该基因特异性引物的位置，箭头代表引物引发的方向。

根据本申请的第二方面，提供本发明第一方面所述环状RNA hsa_circKPNA2_002作为筛查结直肠癌的分子标志物的用途。

本发明研究发现相对于结直肠癌患者癌旁正常组织，环状RNA hsa_circKPNA2_002在结直肠癌组织中显著上调。

因此，所述环状RNA hsa_circKPNA2_002可用于结直肠癌筛查。