[发明专利]一种水产品中孔雀石绿检测方法

说明书

本发明公开了一种水产品中孔雀石绿检测方法，它包括磁性分子印迹聚合物的制备和基于核酸适配体和四氧化三铁模拟酶催化方法的建立等实验步骤。本发明首先用多巴胺聚合法制备孔雀石绿(MG)磁性分子印迹聚合物(MG‑MMIPs)，利用MG‑MMIPs对样品中的微量MG进行吸附，达到富集目标物和去除复杂介质的目的，再将富集的MG解吸后，利用核酸适配体和四氧化三铁模拟酶催化的检测法进行检测。该方法的灵敏度为5nmol L‑1，最低检出限达到3.6nmol L‑1。对MG的两种结构类似物(灿烂绿和结晶紫)以及其他抑菌药(磺胺胍、磺胺、盐酸土霉素和氯霉素)的特异性实验表明，该方法对MG检测具有良好的选择性。

技术领域

本发明涉及孔雀石绿的检测方法，具体是一种水产品中孔雀石绿检测方法。

背景技术

孔雀石绿(Malachite green，MG)是一种有毒的三苯甲烷类物质，又称为盐基块绿、碱性孔雀绿、孔雀绿、碱性绿、中国绿或苯胺绿，为具有金属光泽的深绿色结晶状固体。孔雀石绿也可用作杀菌剂，对于防止霉菌在鱼卵中生长以及真菌的二次污染有较好的效果。但是，孔雀石绿存在高毒、高残留和高致癌、诱变的缺点。由于其价格低廉，而且杀菌效果显著，且没有合适的替代品，目前仍有不法商户在使用。由于其添加量很少就可以达到良好的杀菌效果，给检测水产品中的MG带来一定的难度。因此，建立MG残留的检测方法十分迫切并且具有重要的现实意义。

目前MG的检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法以及酶联免疫法。这几种方法在测定和分析水产品中孔雀石绿的残留都具有结果可靠、灵敏度高、选择性高、重复性好的优点。但是这些方法在样品前处理过程都存在繁琐、复杂、耗时等不足，而且设备昂贵，检测成本高，不仅需要消耗大量的溶剂和时间，还容易造成二次污染，影响检测结果的准确性。酶联免疫法则需要制备抗体，操作复杂，且易受pH值、温度等环境条件的影响，检测条件苛刻。因此，发展一种简单高效的MG检测方法对控制水产品质量安全具有重要意义。

磁性分子印迹聚合物具有构效稳定、富集效率高、特异性强和适用性广等特点，能够对MG起到富集的作用，提高了检测的灵敏度，而基于核酸适配体和四氧化三铁模拟酶催化的检测法具有操作简单、快速、经济的特点。将二者结合起来，以合成的磁性分子印迹聚合物富集MG后用四氧化三铁模拟酶催化检测体系进行检测，不仅提高了MG检测灵敏度，还提高了体系的选择性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水产品中孔雀石绿检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种水产品中孔雀石绿检测方法，所述水产品中孔雀石绿为基于磁性分子印迹聚合物和核酸适配体的四氧化三铁模拟酶催化而检测的水产品孔雀石绿，具体步骤如下：

(1)Fe₃O₄的合成：称取0.30～0.36g聚乙二醇，加入7～9mL超纯水，超声直至聚乙二醇完全溶解，称取2.00～2.06g FeCl₃加入到聚乙二醇溶液中超声溶解，再称取1.4～1.6gFeCl₂加入到上述溶液中至完全溶解，立即加入0.4～0.6mL 0.1mol·L^-1稀盐酸，通氮除氧12～18min，60℃水浴下边搅拌边迅速加入55～65mL氨水，调转速至1500r·min^-1，反应1h，用磁铁进行吸附，并用超纯水洗脱4～6次，真空冷冻干燥后保存备用；