[发明专利]微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素的方法

说明书

本发明涉及一种微波萃取‑固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素的方法。该方法为：(1)底泥样品预处理，加入指示回收率的内标物磺胺甲噁唑‑¹³C₆、诺氟沙星‑D₅、青霉素G钾盐‑D₅、四环素‑D₆、喹乙醇‑D₄、阿莫西林‑¹³C₆和甲氧苄啶‑D₃；加入乙腈:磷酸盐缓冲溶液作提取液微波萃取；(2)固相萃取富集净化目标抗生素；(3)液质联用仪定量检测底泥中七类15种抗生素。该方法通过优选内标物，筛选合适的前处理方法，优化检测条件，可一次性同时检测出水产养殖底泥中含八种新增抗生素的15种抗生素的残留情况，具有高回收率、高灵敏度、高稳定性、低检测限、检测结果更真实可靠等优点。

技术领域

本发明属于有机污染物质残留检测技术领域，涉及一种水产养殖底泥中微量抗生素的检测方法，特别涉及一种微波萃取-固相萃取前处理结合液相色谱串联质谱技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素含量的方法。

技术背景

近年来，我国的水产养殖业发展迅速，规模化与集约化成为养殖的趋势，而水生动物疾病发生的频率也在提高。为了防治鱼类疾病和加快鱼类生长、繁殖,水产养殖业广泛而大量地使用抗生素。抗生素主要通过添加到饲料和直接投入的方式应用于水产养殖过程中，研究表明，仅有20％-30％的抗生素被水生动物吸收，其它则以原形或者代谢物形式被排入环境。这些抗生素可通过范德华力、氢键、疏水分配作用等吸附在底泥上。底泥中大量的微生物经抗生素诱导产生抗性基因，进而产生耐药性，从而导致一些能够抵抗强力抗生素的病原菌出现。

底泥样品中抗生素的含量较低，而且底泥样品基质复杂，干扰物多，这些干扰成分的存在对准确高效地测定底泥中抗生素含量具有较大的挑战。因此，建立一种有效的分离富集方法对准确测定底泥中抗生素的含量尤为重要。底泥样品中抗生素的分析方法主要包括样品的前处理方法和检测方法。目前样品前处理中常用的提取方法主要有索式萃取法、加速溶剂萃取法、超声萃取法、微波萃取法等。其中，微波萃取法对容器中的溶剂和样品直接进行加热，样品与溶剂可在很短的时间内升高到很高的温度，提高了加热速率，强化了溶剂萃取效率，具有时间短、节省试剂、回收率高等优点，尤其适用于底泥等复杂基质。同时，抗生素的种类多，物化性质差异大，提取剂的选择对回收率高低有着直接的影响。理想的环境样品前处理方法是不破坏待测组分的形态，减少污染，并且能使待测组分与基质有效分离。目前常用的检测方法主要有高效液相色谱法(HLPC)和高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)。HPLC-MS/MS兼具HLPC强的分离能力，同时又具有MS高灵敏度和极强的定性鉴定能力，是目前检测环境复杂基质痕量抗生素残留最有效的手段之一，具有分析范围广、分离能力强、定性分析结果可靠、检测限低、分析时间快和自动化程度高等优点。可准确地定性、定量测定复杂混合物的组分。

随着抗生素在水产养殖过程中大量使用，对于能够快速、灵敏、准确地测定各种环境介质中尽可能多的抗生素残留存在迫切需要。然而，目前针对水产养殖底泥中多种抗生素的分离富集和共检测尚无一套完整可靠的检测方法，现有的检测方法普遍存在不稳定、干扰多、检测抗生素的种类和数量有限、回收率有限等问题，因此，急需一种检测结果稳定、干扰小，能够快速、高效、灵敏、准确，同时检测出水产养殖底泥中尽可能多的抗生素残留的包括分离富集和共检测的完整可靠的检测方法。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术的不足，提供了一种检测结果稳定、干扰小、快速、高效的同时测定水产养殖底泥中15种目标抗生素的方法，即一种微波萃取- 固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素的方法。

本发明的技术构思如下：