[发明专利]一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me;Me)pro)-OH的方法

说明书

本发明公开了一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc‑Gly‑Thr(ψ(Me,Me)pro)‑OH的方法，包括如下步骤：步骤一：粗品处理；步骤二：采用高效液相色谱仪器对步骤一中得到的滤液进行分离纯化；步骤三：对步骤二中得到的纯度98.0％以上的高浓度肽溶液进行减压旋蒸浓缩，收集浓缩液，对浓缩液进行冷冻干燥并得到白色絮状粉末产品；本发明采用反相高效液相色谱法分离纯化Fmoc‑Gly‑Thr(ψ(Me,Me)pro)‑OH，通过DAC‑HB200动态轴向压缩柱的等梯度洗脱分离纯化工艺，实现了一次性生产成百上千克纯度达到98.0％以上的Fmoc‑Gly‑Thr(Psi(Me,Me)pro)‑OH产品，既大大提高了产品的合格率，又具有较高的纯化效率，也节省了成本，并且工艺具有简单、快速、生产周期短的优点，适合大规模的工业化生产推广应用。

技术领域

本发明涉及化工技术领域，尤其涉及一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，具体来说是涉及一种依据反相高效液相色谱法大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法。

背景技术

目前，伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的制备方法普遍采用合成方法，合成方法存在如下缺点：工艺流程步骤多，周期长，中间的回流反应易于造成产品的消旋，使得合成之后的产品的不合格率较高，并且在合成过程中需用到具有易燃易爆且毒性较大等危险较大的试剂，成本高，综合效益差，三废污染严重。因此开发出不同于合成方法的工艺非常重要。

发明内容

本发明解决的技术问题是，克服现有技术的缺陷，提供一种可制备得到高合格率且成本较低的大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，包括如下步骤：

步骤一：粗品处理：先将称取60-80g的Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH粗品溶解于3L体积比为甲醇∶水＝4∶1的甲醇水溶液中并形成混合液，再对混合液进行超声处理，待混合液完全澄清，对混合液进行滤膜过滤处理，然后收集滤液备用；

步骤二：采用高效液相色谱仪器对步骤一中得到的滤液进行分离纯化：选取DAC-HB200动态轴向压缩柱作为色谱柱，通过DAC-HB200动态轴向压缩柱对步骤一中得到的滤液进行等梯度洗脱分离纯化并得到样品，采用紫外检测器对样品进行检测，分段收集目的峰值的纯度98.0％以上的高浓度肽溶液；紫外检测器的设置，由于样品会吸收特定波长的紫外光，且样品浓度在一定范围内，浓度越大，吸收值越大，根据样品这个性质，选用一定波长的紫外光透过样品溶液，依据紫外吸收光谱，可以判断有无样品或是样品的浓度大小。

步骤三：对步骤二中得到的纯度98.0％以上的高浓度肽溶液进行减压旋蒸浓缩，收集浓缩液，对浓缩液进行冷冻干燥并得到白色絮状粉末产品，使得制得的白色絮状粉末产品的伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的纯度达到98.0％以上，最终计算分离纯化收率能达到58-68％，并且白色絮状粉末产品经检测能达到较高合格率。

作为优选，步骤二中的DAC-HB200动态轴向压缩柱的流动相A为质量百分浓度0.05％三氟醋酸水溶液、流动相B为质量百分浓度0.05％三氟醋酸乙腈溶液。采用流动相A和流动相B组合形成的流动相进行洗脱，达到了将滤液中含有的杂质分离出来，为后续纯化过程奠定了基础，使得得到的样品能达到较高的纯度，进一步提高了后续制得的白色絮状粉末产品的合格率。