[发明专利]一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me;Me)pro)-OH的方法

权利要求书

1.一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一：粗品处理：先将称取60-80g的Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH粗品溶解于3L体积比为甲醇∶水＝4∶1的甲醇水溶液中并形成混合液，再对混合液进行超声处理，待混合液完全澄清，对混合液进行滤膜过滤处理，然后收集滤液备用；

步骤二：采用高效液相色谱仪器对步骤一中得到的滤液进行分离纯化：选取DAC-HB200动态轴向压缩柱作为色谱柱，通过DAC-HB200动态轴向压缩柱对步骤一中得到的滤液进行等梯度洗脱分离纯化并得到样品，采用紫外检测器对样品进行检测，分段收集目的峰值的纯度98.0％以上的高浓度肽溶液；

步骤三：对步骤二中得到的纯度98.0％以上的高浓度肽溶液进行减压旋蒸浓缩，收集浓缩液，对浓缩液进行冷冻干燥并得到白色絮状粉末产品。

2.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：步骤二中的DAC-HB200动态轴向压缩柱的流动相A为质量百分浓度0.05％三氟醋酸水溶液、流动相B为质量百分浓度0.05％三氟醋酸乙腈溶液。

3.根据权利要求2所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：步骤二中流动相A和流动相B的梯度设置如下：0到15分钟流动相A：流动相B为由(45～55)：(45～55)到(45～55)：(45～55)，15到30分钟流动相A：流动相B为由(50-50)：(50-50)到(50-50)：(50-50)，30到60分钟流动相A：流动相B为由(55-45)：(55-45)到(55-45)：(55-45)。

4.根据权利要求2或3所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：流动相A和流动相B的流速均为1000ml/min。

5.根据权利要求4所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：步骤二中的等梯度洗脱分离纯化方法包括如下步骤：先将步骤一中得到的滤液吸附于DAC-HB200动态轴向压缩柱上，再用占冲洗体积总量80％的质量百分浓度0.05％三氟醋酸乙腈溶液冲洗DAC-HB200动态轴向压缩柱的3个柱子，每个柱子冲洗时间约8分钟，然后用占本次冲洗体积总量5％的质量百分浓度0.05-0.2％三氟醋酸乙腈溶液对DAC-HB200动态轴向压缩柱的2个柱子进行平衡。

6.根据权利要求1或2或3或5所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：DAC-HB200动态轴向压缩柱的柱子直径和装填长度分别为20cm和28cm。

7.根据权利要求6所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：DAC-HB200动态轴向压缩柱内装有固定相为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶。

8.根据权利要求1或2或3或5或7所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：步骤三中的对步骤二中得到的纯度98.0％以上的高浓度肽溶液进行减压旋蒸浓缩至约5-10g/ml后转至不锈钢盘，收集浓缩液。

9.根据权利要求8所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：步骤二中的紫外检测器的检测波长为230nm。

10.根据权利要求1或2或3或5或7或9所述的一种大规模分离纯化伪二肽Fmoc-Gly-Thr(ψ(Me,Me)pro)-OH的方法，其特征在于：步骤一中的滤膜过滤采用孔径0.45μm滤膜过滤。