[发明专利]一种用于血凝方法检测PCV2病毒的双功能纳米抗体、编码基因及其应用

说明书

本发明提供一种用于血凝方法检测PCV2病毒的双功能纳米抗体、编码基因及其应用，属于生物技术领域。该双功能纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供所述双功能纳米抗体的应用、编码基因、携带该编码基因的载体、重组菌。本发明还提供所述双功能纳米抗体的制备方法，将所述双功能纳米抗体的编码基因插入pMECS载体，然后导入大肠杆菌WK6感受态细胞，获得重组菌A；诱导重组菌A表达目的蛋白，裂解重组菌A后纯化获得所述双功能纳米抗体。采用本发明双功能纳米抗体检测PCV2病毒滴度的血凝方法，是国内外首次建立的基于鸡红细胞的PCV2病毒滴度血凝检测方法，灵敏度高、特异性好、耗时短，结果直观。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于血凝方法检测PCV2病毒的双功能纳米抗体、编码基因及其应用。

背景技术

猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2，PCV2)是猪圆环病毒病的病原，是目前发现的最小的动物病毒，病毒粒子直径约为17nm，为共价闭合、环状的单股负链DNA病毒，导致猪群免疫抑制，给养猪业造成巨大的经济损失。经实验室研究发现，PCV2病毒侵染细胞后不能产生相应的细胞病变，导致PCV2病毒在增殖过程中，无法利用肉眼直观判断病毒增殖情况。目前，国内外采用的PCV2病毒检测技术主要有：间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)等等。这些方法虽然可以检测PCV2病毒，在实践中也取得一定的效果，但存在实验操作复杂，耗时长，需要相互匹配的检测试剂以及相关的仪器设备来进行，且仅限于在实验室内进行，难以普及推广。因此，研制开发快速、简便的PCV2病毒检测方法，对于病毒增殖的实时监测具有重要意义。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种用于血凝方法检测PCV2病毒的双功能纳米抗体，用于检测PCV2病毒时灵敏度高、特异性好、耗时短，结果直观。

本发明的另一目的是提供上述双功能纳米抗体的编码基因。

本发明的再一目的是提供上述双功能纳米抗体在PCV2病毒检测中的应用，用于检测PCV2病毒时灵敏度高、特异性好、耗时短，结果直观。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种用于血凝方法检测PCV2病毒的双功能纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供所述双功能纳米抗体的编码基因。

所述编码基因的序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供所述编码基因的载体、重组菌。

本发明还提供所述双功能纳米抗体的制备方法，将所述双功能纳米抗体的编码基因插入pMECS载体，然后导入大肠杆菌WK6感受态细胞，获得重组菌A；诱导重组菌A表达目的蛋白，裂解重组菌A后纯化获得所述双功能纳米抗体。

最后本发明还提供所述双功能纳米抗体在以非诊断为目的的PCV2病毒检测中的应用。

采用所述双功能纳米抗体以血凝方法检测PCV2病毒。

在待检样品中加入所述双功能纳米抗体致敏的鸡红细胞，当发生凝集现象时，表明样品中存在PCV2病毒。

采用55-65ug/ml的双功能纳米抗体加入到体积百分浓度为2％的鸡红细胞悬液中进行致敏，得到双功能纳米抗体致敏的鸡红细胞。