[发明专利]一种动物组织脱细胞化前的清洗方法

说明书

本发明提供一种动物组织脱细胞化前的清洗方法，包括以下步骤：在清除杂物、刮除脂肪后进行剪碎；将动物组织浸泡在碳酸钠和甘氨胆酸钠的浸泡溶液中超声，再用清水洗净；在含有抗坏血酸的PBS缓冲液中浸泡超声，再用清水洗净，该方法不仅能够有效的消毒、灭菌和病毒灭活，也不会损坏细胞外组织基质原有的基本结构。

技术领域

本发明涉及生物材料技术领域，尤其是涉及一种动物组织脱细胞化前的清洗方法。

背景技术

脱细胞的组织器官基质已应用于人体组织修复、各种组织工程试验和再生医学研究。人体和许多动物组织及器官的细胞外基质有极大的相似性和同源性。由同种异体或异种异体组织器官脱细胞制成的生物基质材料，已经成功地用于人体组织临床医学修补和修复。良好的组织器官基质，在植入宿主后，基质支架材料提供初始的生物力学支持，通过与宿主细胞相互作用来调节细胞的行为(如粘附，迁移，增殖和分化)，随着宿主细胞的长入，组织器官基质本身逐步转化成新组织。

除去动物组织器官的原有细胞成分后，也可在体外结合人体细胞，使已有三维框架结构的组织器官基质再次细胞化和功能化，生产可移植到人体的组织及器官。

组织器官基质是由各种复杂的结构蛋白质和功能蛋白质构成的三维立体框架，并含有许多有活性的其他复合物。主要成分包括胶原纤维、糖蛋白、黏蛋白等，其他成分有氨基葡聚糖(透明质酸、硫酸软骨素)等糖类、一些脂质和生长因子。制备组织器官基质的生物工艺流程十分复杂，包括组织器官的采集、保存、清洗、消毒、脱细胞、降低抗原性、病毒灭活和终端灭菌等过程。其中动物组织脱细胞前的清洗处理对组织器官基质的破坏极大，在灭活细菌和病毒的同时，严重地改变组织器官基质生物化学组成成分，破环三维立体框架的超微结构和降低生物力学性能。这些改变影响宿主对植入基质材料的反应，可能致使组织基质产品临床效果变差，难以达到人体组织修复的要求。

因此，本发明提供一种新型的动物组织脱细胞前的清洗方法，既能够有效的消毒、灭菌和病毒灭活，也不会损坏细胞外组织基质原有的基本结构、不改变主要生物化学成分和生物力学性能。

发明内容

本发明提供一种动物组织脱细胞化前的清洗方法，包括以下步骤：

S1.在清除杂物、刮除脂肪后进行剪碎；

S2.将动物组织浸泡在碳酸钠和甘氨胆酸钠的浸泡溶液中超声，再用清水洗净；

S3.在含有抗坏血酸的PBS缓冲液中浸泡超声，再用清水洗净。

优选地，S2中动物组织和浸泡溶液的质量比例为1：1-10。

优选地，S2中浸泡温度为10-40℃，超声时间为1-3h。

优选地，S2中碳酸钠的浓度为0.1-1.0mol/L，甘氨胆酸钠的浓度为2.5-5.0mol/L。

优选地，所述清水均为无菌过滤的纯水。

优选地，S3中抗坏血酸的质量分数为1-5wt％。

优选地，S3中浸泡温度为10-40℃，超声时间为0.5-1h。

本发明的创新点是：先将动物组织剪碎，有利于清洗溶液的渗透，使用碳酸钠和甘氨胆酸钠，两者结合既能够有效脱脂杀菌，也不会引起组织蛋白质变性，最后使用含有抗坏血酸的PBS缓冲液，能够减少后续脱细胞处理的损伤，增加了动物脱织的生物相容性。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。