[发明专利]TIMP-1在制备乳腺癌预后诊断的试剂盒和抑癌药物中的应用

说明书

本发明公开了TIMP‑1在制备乳腺癌预后诊断的试剂盒和抑癌药物中的应用，试剂盒包括用于检测肿瘤实质中中性粒细胞的TIMP‑1表达量的试剂；另外，TIMP‑1中和抗体能抑制乳腺癌细胞的转移。本发明试剂盒辅助现有的预后诊断，以提高患者的生存率；本发明还提供一种新的乳腺癌治疗方案。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及TIMP-1在制备乳腺癌预后诊断的试剂盒和抑癌药物中的应用。

背景技术

乳腺癌是全世界女性发病率最高的恶性肿瘤。在我国的广东省等沿海发达地区，由于生活方式的改变以及社会压力的增加，女性乳腺癌的发病率远高于世界平均增长速度。手术治疗后约50％的患者可以治愈，但其余患者可能发生转移或疾病复发。因此，预测高危患者，并尽快进行恰当的辅助治疗有助于改善患者的生存率。目前，预后指标包括肿瘤大小、淋巴结是否发生转移、病理学分级、雌孕激素受体状态等。研究表明，雌孕激素受体阳性患者复发率低，生存率高，预后较好；Ki-67是一种与增殖相关的核蛋白，Ki-67过表达是肿瘤局部复发的重要危险因素。随着对乳腺癌疾病发展过程及机制的了解，从中寻找预后指标和寻求乳腺癌治疗的新思路。

中性粒细胞是外周血最常见的细胞之一。作为炎性免疫反应的主要参与细胞，在乳腺癌的发病发展中也起着重要作用。在乳腺癌据报道，乳腺癌患者中中性粒细胞与淋巴细胞的比值升高与较差的预后相关。但在肿瘤实质中，中性粒细胞与预后相关尚不清楚。

肿瘤细胞上皮间质转化(EMT)是乳腺癌转移的重要机制之一，发生EMT的肿瘤细胞迁移和侵袭能力显著提高。肿瘤微环境与肿瘤细胞之间相互作用可能影响肿瘤的扩散。多项研究表明，发生EMT的肿瘤细胞能够重新塑造肿瘤微环境，使其更进一步加深肿瘤细胞EMT的程度，促进转移等。因此，有必要针对EMT设计出一种药物，以抑制乳腺癌细胞的转移。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术存在的不足，而提供TIMP-1在制备乳腺癌预后诊断的试剂盒和抑癌药物中的应用，该试剂盒包括于检测肿瘤实质浸润的中性粒细胞中TIMP-1表达量的试剂，试剂盒可以辅助现有的预后诊断，以提高患者的生存率；另外，TIMP-1中和抗体可以抑制乳腺癌细胞的转移。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种用于乳腺癌预后诊断的试剂盒，其包括用于检测肿瘤实质浸润的中性粒细胞中TIMP-1表达量的试剂。

作为上述技术方案的改进，试剂盒包括用于检测中性粒细胞CD66b表达量和TIMP-1表达量的试剂。

作为上述技术方案的进一步改进，所述用于检测中性粒细胞CD66b表达量的试剂包括CD66b一抗和荧光标记的CD66b二抗，所述用于检测中性粒细胞TIMP-1表达量的试剂包括TIMP-1一抗和荧光标记的TIMP-1二抗，CD66b二抗标记的荧光和TIMP-1二抗标记的荧光不相同，CD66b一抗、CD66b二抗、TIMP-1一抗和TIMP-1二抗为结合抗体。

作为上述技术方案的更进一步改进，所述试剂还包括抗原修复液和过氧化氢。

另外，本发明还提供一种用于抑制乳腺癌的药物，其包括TIMP-1中和抗体。

作为上述技术方案的改进，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

本发明还提供试剂盒的一种检测方法，其包括以下步骤：

1)收集患者乳腺癌组织样本，经过脱水、包埋、切片等步骤制成组织切片；

2)将1)中组织切片进行脱蜡、水化、抗原修复、封闭非特异位点等步骤，对CD66b一抗、TIMP-1一抗与组织切片进行孵育；

3)对2)中的组织切片与荧光标记的CD66b二抗、荧光标记的TIMP-1二抗进行孵育；