[发明专利]一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干制剂

说明书

本发明属于蛋白质和多肽药物技术领域，具体涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体‑Fc融合蛋白冻干粉制剂。该冻干粉制剂包含重组人肿瘤坏死因子受体‑Fc融合蛋白、氨基酸、羟乙基淀粉、填充剂、表面活性剂和缓冲剂。通过本发明的处方及冻干工艺进行冻干后得到的重组人肿瘤坏死因子受体‑Fc融合蛋白稳定性较高，适合大规模生产，且利于贮藏和运输。

技术领域

本发明属于蛋白质和多肽药物技术领域，具体涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干粉制剂。

背景技术

肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)是一种多功能的细胞因子，与多种疾病及病理反应密切相关，在炎症反应、内毒素性休克、恶液质和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病中起关键作用，其过量表达是多种自身免疫性疾病的病理机制之一。对TNF受体的研究表明，肿瘤坏死因子受体分布广泛，与肿瘤坏死因子的亲和力较强。这种可溶性受体可以中和TNF，在体内对TNF的活性起负调节作用。用受体免疫球蛋白融合技术，将受体的细胞外区与人免疫球蛋白的Fc段基因融合，在体外表达出相应的重组人型肿瘤坏死因子受体(p75)-Fc融合蛋白。它有免疫球蛋白的体内半衰期长、组织穿透力强等特性，可以特异性地与体内的TNF结合，从而抑制关节的炎症反应。

CN201480065341公开了一种TNFR-Fc融合蛋白的液体制剂，包含氨基酸、缓冲溶液和等渗剂，虽然一定程度上提高了TNFR-Fc融合蛋白的稳定性，但长时间放置仍会导致聚体含量增加，活性下降等现象。

CN201010613663公开了一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的冻干粉针剂，含有自蔗糖、海藻糖等保护剂以及醋酸钠、氨丁三醇等缓冲剂，冻干后的重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白稳定性较好，但蛋白的玻璃转化温度仍有待提高。

由于冷冻干燥过程是个复杂变化的过程，会有诸多因素影响蛋白质的稳定，从而引起变性。重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干过程中有容易聚集的倾向，无论怎样的冻干程序都对纯的蛋白造成显著损害，选择添加合适的保护剂来保护重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的活性是亟待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的冻干制剂，该制剂配方简单，蛋白体系稳定，便于大规模生产、贮存和运输，临床给药方便。发明人经过大量创造性实验，偶然发现一种特定处方的冻干重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白，并开发了一种适合于该处方的冻干工艺，制备的重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白制剂既可以提高蛋白的玻璃转化温度，又能抑制各种组份在冻干过程中的结晶，从而提高其稳定性。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案具体如下：

一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干制剂，所述冻干制剂包含重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白、氨基酸、羟乙基淀粉、填充剂、表面活性剂和缓冲剂。

所述氨基酸为精氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、赖氨酸的中的一种或几种。

所述填充剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇中的一种或几种。

所述表面活性剂为吐温20。

所述缓冲剂为Tris/HCl。

所述重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干制剂包含如下组份：

优选地，所述重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白冻干制剂包含如下组份：

所述重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白采用如下工艺制备半成品液：