[发明专利]尿液中苯、甲苯和二甲苯代谢物的检测方法

说明书

本发明公开了一种尿液中苯、甲苯和二甲苯代谢物的检测方法，包括如下步骤：(1)将尿液与第一溶剂混合，然后离心，得到上清液；将上清液与第二溶剂混合，得到第一样品液，采用液相色谱串联质谱检测第一样品液中的第一代谢物；第一代谢物包括苯巯基尿酸S‑PMA、8‑羟基‑2‑脱氧鸟苷8‑OHdG、2‑甲基马尿酸2‑MHA、3‑甲基马尿酸3‑MHA和4‑甲基马尿酸4‑MHA；(2)将部分第一样品液与第三溶剂混合，得到第二样品液，采用液相色谱串联质谱检测第二样品液中的第二代谢物；第二代谢物包括马尿酸HA。本发明的方法可以联合检测六种以上代谢物。

技术领域

本发明涉及一种尿液中代谢物的检测方法，尤其是一种尿液中苯、甲苯和二甲苯代谢物的检测方法。

背景技术

生物监测是指对人体生物材料(血液、尿液等)中的化学物质及其代谢物含量或由它们产生的生物效应水平进行监测，可以反映机体不同途径及来源的化学物质的总接触量。因此，生物监测可以提供机体实际接触水平，因而比环境监测更具有优势。

苯系化合物是工业上应用十分广泛的化学品，可用做化学原料、溶剂、稀释剂、燃料等。苯系化合物也是一类常见的环境污染物。在苯系化合物中，苯、甲苯和二甲苯最为常见。苯具有血液毒性和致癌性；甲苯和二甲苯的毒性虽然比苯小，但长期接触对皮肤、内分泌、神经系统等也会产生有害影响。因此，对苯、甲苯及二甲苯的暴露水平进行生物监测在职业防护中是非常必要的。然而，目前针对苯系化合物代谢物的联合检测方法的报道则比较少。

CN106680394A公开了一种液相色谱串联质谱测定尿液中14种环境荷尔蒙含量的试剂盒，所述14种环境荷尔蒙分别为：邻苯二甲酸单甲基酯、邻苯二甲酸单乙基酯、邻苯二甲酸单丁基酯、邻苯二甲酸单苄基酯、邻苯二甲酸单乙基己基酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、双酚A、三氯沙。CN106680393A公开了一种液相色谱串联质谱测定尿液中14种环境荷尔蒙含量的方法，采用高效液相色谱串联质谱法定量检测尿液样品中14种环境荷尔蒙，先用高效液相色谱将经过预净化处理的尿液样本进行初步分离，串联质谱法负离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式对目标组分的母离子-子离子对进行扫描，氘代同位素内标法进行准确定量，以标准品浓度与内标品浓度比值为X轴，以标准品响应峰面积与内标品响应峰面积比值为Y轴，建立校正曲线，计算上述14种环境荷尔蒙的含量。CN103837624A公开了一种尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色谱串联质谱测定方法，将样品经稀释后直接引入液相色谱-电喷雾电离-串联质谱仪进行测定，可快速、准确检测出尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的含量水平。CN102788852A公开了一种液相色谱-串联质谱法检测人体尿液中七种芳香胺化合物的方法，即苯胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、1-氨基萘、2-氨基萘、3-氨基联苯和4-氨基联苯的检测，该方法采用浓HCl水解尿液，并通过PAH分子印迹柱对样品进行纯化处理，进液相色谱-串联质谱联用仪分析。上述方法采用液相色谱串联质谱检测一些芳香族化合物及其代谢物，但均不是苯、甲苯和二甲苯的代谢物。

CN103175921A公开了一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢物的方法，配制系列浓度的混合标样工作液，进行仪器分析，根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系制成标准曲线；取待测尿样，加入含四种特征代谢物同位素内标物混合工作标准品溶液；用固相萃取小柱吸附目标化合物，然后进行仪器分析；得到四种特征代谢物的响应值；根据已知的系数f，求出尿样中四种特征代谢物的浓度。所述的仪器分析是采用超高压液相色谱串联质谱法，色谱柱采用粒径＜2μm的反相C18色谱柱。上述方法采用固相萃取法分离代谢物，由于受萃取条件的限制，仅能针对有限的四种代谢物进行检测，因而无法全面检测苯系化合物的代谢物。

近年来，很多企业使用苯系化合物的混合物，现场往往存在多种苯系化合物。因此，仍然需要开发新的检测方法，以全面检测苯系化合物的代谢物。

发明内容