[发明专利]百合杂交后代高效离体成球及缩短童期的方法

权利要求书

1.百合杂交后代高效离体成球及缩短童期的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、百合胚珠挽救及愈伤诱导：从百合杂交后代果实中收集胚珠，消毒处理后用刀沿着纵向划破胚珠的珠被，然后接种在含6-BA 0.8～1.0mg/L、NAA 0.3～0.5mg/L和蔗糖30～45g/L，pH值5.5～6.5的MS培养基上，培养至长出黄绿色愈伤或丛生苗；

B、丛生芽的诱导：将步骤A的黄绿色愈伤或丛生苗转接到诱导分化培养基上进行培养，诱导产生丛生芽；所述诱导分化培养基为：MS+6-BA 0.8～1mg/L+NAA 0.5～0.6mg/L+蔗糖30～45g/L，pH值5.5～6.5；

C、仔球的分化及膨大：从步骤B的丛生芽中切下芽头，将芽头纵切，一分为二，再将切分好的半个芽头转接到仔球分化及膨大培养基中，培养至每个材料离体分化出2～4粒小仔球；所述仔球分化及膨大培养基为：MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.1～0.15mg/L+蔗糖90～120g/L，pH值5.5～6.5；

D、变温处理相变诱导：将步骤C分化出的小仔球转移到11～15℃条件下暗处理5～6周；然后于4℃条件下暗处理10周；

E、再生植株移栽：将步骤D经处理后的仔球转移到温室中适应2周后，移栽至基质中培养，直至仔球出芽，出芽后继续在基质中培养一年，之后移栽大田，常规种植管理；所述基质为草炭：蛭石：细沙体积比2:1:1，或草炭：蛭石：珍珠岩体积比2:1:1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A培养条件为：20～30℃，光照12～14h/d，光照强度15000～20000Lux。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B和C培养条件为：21～25℃，光照12～14h/d，光照强度15000～20000Lux。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D是将分化出的小仔球转移到13℃条件下暗处理5～6周；然后于4℃条件下暗处理10周。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A消毒的具体方法为：收集的胚珠用75％酒精浸泡60～90s，然后用3％的次氯酸钠溶液浸泡8～10min，再用无菌水冲洗3～5遍。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)百合胚珠挽救及愈伤诱导：杂交授粉60～70天后从百合果实中收集胚珠，用75％酒精浸泡60～90s，然后用3％的次氯酸钠溶液浸泡8～10min，再用无菌水冲洗3～5遍，将完整的胚珠置于无菌超净台中，用刀沿着纵向划破胚珠的珠被，将处理好的胚珠接种在含6-BA0.8～1.0mg/L、NAA 0.3～0.5mg/L和蔗糖30～45g/L，pH值5.5～6.5的MS培养基上，切口与培养基表面平行，并接触到培养基，于20～30℃，光照12～14h/d，光照强度15000～20000Lux的条件下培养，直至长出黄绿色愈伤或丛生苗；

2)丛生芽的诱导：将步骤1)中黄绿色愈伤或丛生苗转接到诱导分化培养基上，于21～25℃，光照12～14h/d，光照强度15000～20000Lux的条件下培养，诱导产生丛生芽；

3)仔球的分化及膨大：从步骤2)的丛生芽中切下一个芽头，将芽头纵切，一分为二，再将切分好的半个芽头，转接到仔球分化及膨大培养基中，插入的深度为整个芽头长度的三分之一，于21～25℃，光照12～14h/d，光照强度15000～20000Lux的条件下培养4～5个月，每个材料离体分化出2～4粒小仔球；

4)变温处理使仔球产生童期缩短相变：将步骤3)中离体分化出的小仔球转移到13℃条件下暗处理5～6周；

5)仔球低温处理打破休眠：将步骤4)中经过相变诱导的小仔球转移到4℃条件下暗处理10周，打破仔球休眠；

6)再生植株移栽：将步骤5)打破休眠的仔球于温室中适应2周后，移栽至基质中，浇一次透水，培养2～3周仔球即出芽。