[发明专利]一种油菜耐渍基因BnaLPP1及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种油菜耐渍基因BnaLPP1的制备方法，步骤是：1、以淹水胁迫处理的油菜芽为材料，采用植物总RNA抽提试剂盒提取总RNA，采用反转录试剂盒，反转录合成cDNA第一链，扩增该基因片段；2、扩增程序：共35个循环，利用胶回收试剂盒回收PCR产物，接着将回收产物与pTOPO载体连接，得到重组质粒pTOPO‑BnaLPP1，转化大肠杆菌感受态细胞，测序，核苷酸序为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2及氨基酸序列SEQ ID NO.3；3、对测序的结果与模板序列进行比对，采用胶回收试剂盒回收目的基因和表达载体。4、接着用T4连接酶，扩繁后提取重组质粒。5、对重组质粒进行酶切验证。该基因的应用。方法易行，操作简便，实现在油菜中的快速、准确分离。提高作物耐渍能力，对提高作物产量意义重大。

技术领域

本发明属于生物工程和转基因技术领域，更具体涉及一种油菜耐渍基因BnaLPP1，同时还涉及一种油菜耐渍基因BnaLPP1的制备方法，还涉及一种油菜耐渍基因BnaLPP1的用途。

具体涉及油菜耐渍基因BnaLPP1及其应用。

背景技术

渍害是制约长江流域农业生产的主要因素之一，由于长江流域湿润多雨的气候特点，加上栽培模式等因素的影响，更加导致了渍害程度加深。如何解决渍害问题是实现农业可持续发展的重要挑战。

由于传统作物耐渍育种周期长，成效缓慢且受耐渍种质资源狭窄等因素的制约，使得当前耐渍育种进展缓慢。当前迅速发展的生物技术育种，尤其是转基因技术打破了物种间的限制，为高效耐渍育种提供了新的途径，但耐渍基因资源的获得是耐渍转基因作物新品种的关键。油菜是世界上重要的油料作物之一，在我国油菜主要分布于长江流域,在该地区主要为水稻油菜的轮作制度，油菜渍害发生十分普遍，占长江流域总面积10-20％以上。从耐渍油菜品种中挖掘优异的耐渍基因材料，并克隆耐渍基因在植物耐渍育种中具有重要的价值。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足之处，是在于提供了一种油菜耐渍基因BnaLPP1，这项研究对阐明植物耐渍机制以及利用耐渍基因提高作物耐渍能力有重要意义。超表达该基因可以有效提高淹水胁迫下植株存活率85％左右，并且其生长量比野生型提高65％。

本发明的另一个目的是在于提供了一种油菜耐渍基因BnaLPP1的制备方法，方法易行，操作简便，实现该基因在油菜中的快速、准确分离。

本发明还有一个目的是在于提供了一种油菜耐渍基因BnaLPP1在提高植物耐渍中的应用，在渍害发生时，可以提高作物耐渍能力，对提高作物产量意义重大。

为了实现上述的目的，本发明采取以下技术方案：

依据前期油菜渍害胁迫响应转录组学测序结果(Comparison of TranscriptomesUndergoing Waterlogging at the Seedling Stage Between Tolerant and SensitiveVarieties of Brassica napus L.,Journal of Integrative Agriculture,2015,14(9):1723-1734)，鉴定到渍害胁迫诱导表达基因BnaLPP1，申请人以油菜芽为材料，分离出BnaLPP1基因，将该基因构建表达载体，转化到拟南芥后，可显著提高植株的耐渍能力。利用本发明所述基因，构建各种植物表达载体，可广泛应用于转基因植物和作物耐渍新品种的培育。

一种油菜耐渍基因BnaLPP1的制备方法，其步骤是：