[发明专利]一种产D-泛解酸内酯水解酶的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种产D-泛解酸内酯水解酶的基因工程菌，其特征在于，所述工程菌的构建方法为：将D-泛解酸内酯水解酶的编码基因转入宿主乳酸克鲁维酵母细胞中，制得所述工程菌；所述工程菌内含有重组载体pZL505-DL的核苷酸片段，所述的DL序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述宿主为乳酸克鲁维酵母GG799。

3.一种权利要求1所述产D-泛解酸内酯水解酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

(1)以合成的DL序列为模板，利用SEQ ID NO:2所示的序列为上游引物，SEQ ID NO:3所示的序列为下游引物通过反应获得产物，再用XhoⅠ和KpnⅠ对PCR产物和pZL505载体进行双酶切后连接获得重组载体pZL505-DL；

(2)利用大肠杆菌感受态细胞扩增所述重组表达载体并收集扩增产物，将所述扩增产物用SacⅡ进行酶切后转化宿主细胞获得基因工程菌。

4.一种权利要求1所述产D-泛解酸内酯水解酶的基因工程菌的应用，其特征在于，用于水解D-泛解酸内酯或拆分DL-泛解酸内酯。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述水解D-泛解酸内酯或拆分DL-泛解酸内酯的方法为：将基因工程菌接种至培养基中培养，获得发酵粗酶液后用树脂吸附，制成酶制剂；之后再将酶制剂用于水解D-泛解酸内酯内酯或拆分DL-泛解酸内酯。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养基的组成为蔗糖40g/L、蛋白胨20g/L、牛肉膏15g/L、NaCl 6g/L、KCl 6g/L、CaCl₂ 3g/L、MgSO₄3g/L。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述酶制剂的制备方法为：以树脂D380为载体，以戊二醛作为交联剂，D-泛解酸内酯水解酶的添加量10～50U/g树脂，吸附pH 6.5～7.5，吸附温度20～35℃，吸附时间3～8h；戊二醛终浓度0.1～1％，交联时间0.5～3h。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养条件为：25～35℃温度条件下，150～200rpm，培养时间为70～90h。