[发明专利]一种金线莲的无菌播种和组织培养方法

说明书

本发明公开了一种金线莲的无菌播种和组织培养方法，包括以下步骤：a)、台湾金线莲授粉；b)、台湾金线莲播种：选择蒴果，用流水冲洗，然后用药棉沾75％酒精擦拭蒴果，再放在10倍漂白水浸泡震荡15分钟，然后用无菌水冲洗3～4次，晾干水分，用无菌解剖刀将蒴果切开一个小口，将蒴果中的种子均匀的撒在培养基中；c)、台湾金线莲茎段增殖：将粗壮、叶片偏红的台湾金线莲个体切叶片，保留两个茎节的茎段平放轻压接种到培养基中；d)、台湾金线莲生根培养：2cm以下的小苗和3cm以上的小苗分级接种到培养基中。本发明利用种子进行有性繁殖利于基因交流，使后代个体更富有生活力更能适应新的环境，为种质资源保存及物种的延续提供了有力的支持。

技术领域

本发明涉及金线莲培养技术领域，具体为一种金线莲的无菌播种和组织培养方法。

背景技术

台湾金线莲素有“金草”“神药”“鸟人参”之称，为兰科开唇兰属植物，兼具赏叶和观花的功用，是观赏价值较高的室内花卉珍品。其全草药用，性味甘、淡、平、凉，具有清热、凉血、祛风利湿、强心利尿、固肾平肝以及降血压等功效，对无名肿痛、发烧、止泻、蛇伤均有显著疗效，被称为“药中之王”，台湾金线莲显著的要用功效及保健功能已为世人公认，其产品具有广阔的市场前景。

台湾金线莲在自然条件下萌发率极低，加上长期采挖，野生种质资源稀缺，已濒临灭绝。金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，一般不易发芽，以分根法或扦插法繁殖，繁殖系数低，很难规模种植。无性繁殖虽然能够保持母本的优良特性，但是适应外界环境能力差，与无性繁殖相比，利用种子进行有性繁殖利于基因交流，使后代个体更富有生活力更能适应新的环境，为种质资源保存及物种的延续提供了有力的支持。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种金线莲的无菌播种和组织培养方法，解决了金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，一般不易发芽，以分根法或扦插法繁殖，繁殖系数低，很难规模种植的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种金线莲的无菌播种和组织培养方法，包括以下步骤：

a)、台湾金线莲授粉：10月份选择长势好的台湾金线莲开花个体进行授粉，授粉时，先将雌花(母本)的花粉块除去(去雄)，再将采集的父本花粉块用小镊子轻轻地放在母本的柱头上，挂好标牌；

b)、台湾金线莲播种：选择8～9个成熟的台湾金线莲无开裂、无虫孔的蒴果，用流水冲洗，然后用药棉沾75％酒精擦拭蒴果，再放在10倍漂白水浸泡震荡15分钟，然后用无菌水冲洗3～4次，晾干水分，用无菌解剖刀将蒴果切开一个小口，将蒴果中的种子均匀的撒在培养基：美国花宝1号+马铃薯5000～15000mg/L+香蕉5000～15000mg/L+活性炭1g/L中，黑暗培养1个月，然后一支灯管培养，每天光照12小时，温度控制在25±2℃，5个月后有种子膨大，先形成原球茎，一个原球茎分化出叶和根，10个月小苗有3cm高，也有很多愈伤组织和绿苗、白化苗出现，将3cm高的健壮个体和愈伤组织分别，转接到培养基：美国花宝1号+马铃薯5000～15000mg/L+香蕉5000～15000mg/L+活性炭1g/L中，细小的、白化苗、愈伤组织剔除不要，2支灯管培养，每天光照12小时，温度控制在25±2℃，4个月后小苗长到8cm高，而愈伤组织长出的苗多，但是细弱；

c)、台湾金线莲茎段增殖：将粗壮、叶片偏红的台湾金线莲个体切叶片，保留两个茎节的茎段平放轻压接种到培养基：美国花宝1号+NAA0.1～5mg/L+BA1～5mg/L+KT1～5mg/L+马铃薯5000～15000mg/L+椰乳10％(V/V)中，2支灯管培养，每天光照12小时，温度控制在25±2℃，3～4个月后一个茎段上有3个小芽长出；