[发明专利]基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒

说明书

本发明涉及农药检测领域，具体而言，涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒。所述试剂盒包括：包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。本发明提供的三唑磷吸附功能材料具有较高的选择性，采用虚拟模板可解决模板渗漏问题，可以代替生物抗体应用于荧光免疫技术；该吸附功能材料由化学方法制备，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统生物抗体制备周期长、易失活、成本高等缺点。

技术领域

本发明涉及农药检测领域，具体而言，涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒。

背景技术

有机磷杀虫剂是使用最广泛的杀虫剂，包括农业中使用的一些毒性最大的化学品。三唑磷(triazophos)已广泛用作高毒性有机磷的优良替代品，以控制谷物、水果、蔬菜上的害虫。由于化学和光学稳定性及半衰期长，三唑磷可能在自然环境中残留时间长。据文献报道，三唑磷诱导大鼠氧化应激和组织病理学改变，可能对人类健康也有潜在的危害。自2016年底，中国政府已禁止在蔬菜上使用三唑磷。因此，有必要开发一种有效的分析方法，用于定期监测农业和环境样品中的三唑磷残留。

目前三唑磷检测方法有气相色谱(GC)，气相色谱与质谱联用(GC-MS)，液相色谱与质谱联用(LC-MS)，以及基于酶/抗体的免疫分析。但成本高，操作复杂，分析时间长、仪器尺寸大等是使用GC/LC-MS进行现场直接检测的主要缺陷。另一方面，抗体的生产，试剂的稳定性和实验动物的使用限制了免疫测定的广泛应用。因此有必要建立一种灵敏，稳定，廉价的三唑磷检测方法，特别适用于现场快速检测，以满足快速响应和控制的需要。

分子印迹是模仿抗原-抗体相互作用原理，是一种在合成分子印迹聚合物(MIPs)中产生特异性识别位点的技术，是天然抗体的替代品。MIP具有很多优点，如高化学稳定性和良好的刚性，特异性识别，低成本和易于合成等。因此，MIPs已被广泛用于许多仿生免疫吸附测定中，特别是仿生酶联免疫吸附测定。然而，酶是大分子物质，酶标抗原可能引起空间位阻，影响竞争效应，进一步降低方法的灵敏度。而用量子点(QDs)替代酶标记半抗原探针尺寸小且结构较简单。QDs灵敏度高，亮度强和光稳定性好，发射波长可调，具有宽激发光谱及窄发射光谱。用QD标记半抗原可以增加方法的灵敏度。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于克服传统的三唑磷检测方法存在检测时间长、仪器价格昂贵、特异性抗体难制备等缺陷，提供一种基于量子点标记三唑磷仿生免疫吸附检测方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒，包括：

包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；

所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。

为了防止分子模板泄漏，本申请选择三唑酮(三唑磷的结构类似物)作为模板，在固相载体(例如96孔板)表面合成分子印迹膜作为识别材料，同时合成CdSe/ZnS QDs标记的探针。本发明开发了基于微阵列印迹膜的直接竞争CdSe/ZnS量子点荧光测定法，并用于测定样品(例如蔬菜与水果，如甘蓝和苹果)中的三唑磷。

根据本发明的另一方面，本发明还涉及使用如上所述的试剂盒进行三唑磷检测的方法，包括：

使用待检测物与所述量子点探针标记的三唑磷半抗原竞争性地与固相载体上包被的分子印迹聚合物膜结合，读取所述量子点探针的荧光值以确定所述待检测物中三唑磷的含量。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：