[发明专利]一株敲除fimA基因的重组大肠杆菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201811330715.8 | 申请日： | 2018-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109576198B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 应汉杰;刘娜;陈勇;任培芳;奚迅;陈天鹏 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/08;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 胡建华 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株敲 fima 基因 重组 大肠杆菌 及其 构建 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.敲除fimA基因重组大肠杆菌CIBTS1688在生产L-苏氨酸中的应用，其特征在于，所述敲除fimA基因重组大肠杆菌CIBTS1688的构建方法如下：
(1) 将质粒PKD46电转入大肠杆菌CIBTS1688中，筛选出带有PKD46质粒的重组菌，培养重组菌，用L-阿拉伯糖诱导，再将L-阿拉伯糖诱导后的重组菌细胞制备成感受态细胞；
(2) 以SEQ ID NO：1~2所示的核苷酸序列为引物，以卡那霉素抗性基因为模板，PCR扩增得到打靶片段，所述打靶片段的基因序列如SEQ ID NO：3所示，胶回收纯化打靶片段；
(3) 将步骤（2）纯化后的打靶片段电转入步骤(1)得到的感受态细胞中，以卡那霉素为抗性标记，筛选得到敲除fimA基因的重组大肠杆菌。
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