[发明专利]血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法

说明书

本发明涉及一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法。该方法包括以下步骤：(A)制备微生物悬液；(B)制备标准曲线：分别向微生物悬液中加入梯度浓度的乙酰螺旋霉素，培养，测定吸光度，制备得到标准曲线；(C)样品采集：采集血浆；(D)分别精密量取待测血浆样品和空白血浆样品，加入步骤(A)的微生物悬液中混匀，得待测混合溶液和空白对照；(E)测定待测混合溶液的微生物浓度；(F)将待测混合溶液的微生物浓度与空白对照进行比较，通过标准曲线计算得出乙酰螺旋霉素的浓度。本发明方法的分析时间短、灵敏度高，准确度、精密度、回收率、稳定性经考察后均符合要求，适用于乙酰螺旋霉素在体内的药代动力学试验研究。

技术领域

本发明涉及抗生素类药物的血药浓度监测技术领域，特别是涉及一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法。

背景技术

乙酰螺旋霉素(Acetylspiramycin)是由单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋毒素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ和双乙酰螺旋霉素Ⅲ四个组分为主的混合物，结构和成分复杂，具体结构如式1所示。纯品为白色至微黄色粉末，在甲醇、乙醇、丙酮或乙醚中溶解，在水中几乎不溶，在石油醚中不溶。对紫外线敏感，在阳光下照射1天，可分解50％。乙酰螺旋霉素对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌和梭菌属等有较强的抗菌活性，对李斯特菌属、卡他布兰汉菌、淋球菌、胎儿弯曲菌、流感杆菌、百日咳杆菌、类杆菌属、产气荚膜杆菌、痤疮丙酸杆菌、消化球菌和消化链球菌以及支原体、衣原体、梅毒螺旋体、弓形体、隐孢子虫等也有较强的作用。

由于厂家生产工艺和原料的差异，不同厂家生产的乙酰螺旋霉素其组分的比例各不相同，而目前并无研究阐明各组分与其药效的具体关系，故一般的化学分析方法或高效液相色谱法等检测方法无法通过对各组分的分别定量构建统一的乙酰螺旋霉素的量效关系。而本方法基于乙酰螺旋霉素的抑菌作用，无需考虑其组分比例，因而可用于建立具有普适性的量效关系。

发明内容

基于此，本发明提供一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法。该方法准确、快速、特异性强，具有较高的专属性。

具体技术方案如下：

一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法，包括以下步骤：

(A)制备微生物悬液；

(B)制备标准曲线：分别向微生物悬液中加入梯度浓度的乙酰螺旋霉素，培养，测定吸光度，制备得到标准曲线；

(C)样品采集：采集血浆；

(D)分别精密量取待测血浆样品和空白血浆样品，加入步骤(A)的微生物悬液中混匀，得待测混合溶液和空白对照；

(E)测定待测混合溶液的微生物浓度；

(F)将待测混合溶液的微生物浓度与空白对照进行比较，通过标准曲线计算得出乙酰螺旋霉素的浓度。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明建立了采用微生物比浊法测定人或动物血浆中乙酰螺旋霉素含量的方法，其测定原理与临床应用的要求一致，能准确直观地反映抗生素的医疗价值，且对供试品的纯度要求不高，既适用于精制品，又适用于制剂。此外，本方法无需考虑乙酰螺旋霉素的组分比例，因而可用于建立具有普适性的量效关系。本发明方法的分析时间短、灵敏度高，准确度、精密度、回收率、稳定性经考察后均符合要求。本方法具有很高的专属性和很好的重复性，大大提高了检测结果的准确度。本发明检测方法的线性范围为0.25μg/ml～7.5μg/ml，检测下限为0.25μg/ml，适用于人或动物血浆中乙酰螺旋霉素的含量测定，适用于乙酰螺旋霉素在体内的药代动力学试验研究。

具体实施方式