[发明专利]一种大熊猫促黄体素胶体金免疫层析试纸条、其制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种大熊猫促黄体素胶体金免疫层析试纸条、其制备方法及应用，属于生物检测技术领域，包括胶条，所述胶条包括顺序搭接的样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜和吸水垫，所述胶体金垫上涂有覆盖有胶体金颗粒标记的鼠抗大熊猫促黄体素β亚基单克隆抗体和兔抗大熊猫促黄体素β亚基多克隆抗体混合液层，所述硝酸纤维素膜上包被有Protein A的质控线，以及包被有兔抗大熊猫促黄体素β亚基多克隆抗体的检测线，所述样品垫上还设置有点样孔。本发明制备的胶体金免疫层析试纸条储存方便，操作简单，检测速度快，适用于大熊猫尿液中LH的检测，可用于大熊猫发情配种季节现场使用，辅助判断大熊猫的排卵时机。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种大熊猫促黄体素胶体金免疫层析试纸条、其制备方法及应用。

背景技术

大熊猫在一年中只有一次排卵机会，并且对于雌性个体来讲能接受自然交配的时间也非常短，最短的只有几个小时，如果在不恰当的时机将雌雄个体配对进行自然交配将会导致动物间激烈的打斗，引起动物的伤亡；而若采用人工授精，对人工授精时机的把握同样非常重要，由于大熊猫人工授精需要在麻醉状态下进行，已有的研究结果证明，若在排卵前对动物实施麻醉，可导致排卵抑制与延迟，而卵子维持授精能力的时间相对于精子而言要短得多，因此确定大熊猫确切排卵与配种以及人工授精时机是大熊猫成功繁育的关键技术。而目前对大熊猫排卵规律及其影响因素的了解还比较有限，对确切配种的时机国内外尚无一致意见，这也是导致目前大熊猫繁殖效率在年度间波动，繁殖效率不稳定的重要原因。目前对大熊猫排卵规律的认识上，主要通过监测发情期雌激素与孕激素水平变化情况以及发情行为观察加上经验进行综合判断，对配种时机(自然交配与人工授精)的把握目前国内外尚无统一认识。

促黄体素(LH)是脑垂体前叶嗜碱性细胞分泌的糖蛋白激素，由α和β两个亚基组成，β亚基决定激素的特异抗原性和特异功能，但需与α亚基结合才具有生物学活性，是一种可以直接诱发排卵的生殖激素，通常情况下动物LH峰值与排卵间隔时间相对固定，检测LH是确定适时人工授精与适时自然交配指标的有效手段。

胶体金技术是一种新型的免疫标记物，在很多领域都得到了广泛应用，具有使用方便快速，便于基层使用和现场使用，所有反应能在15分钟内完成；成本低，不需要特殊的仪器设备；应用范围广，可适应多种检测条件；标记物稳定，标记样品在4℃贮存两年年以上，无信号衰减现象；胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，对人体无毒害。由于种属差异的原因，目前还没有大熊猫LH胶体金检测技术。

发明内容

本发明目的是提供一种大熊猫促黄体素胶体金免疫层析试纸条、其制备方法及应用，通过获得抗大熊猫LH多克隆抗体和单克隆抗体，结合胶体金免疫层析技术制备成胶体金免疫层析试纸条，本发明的提出为大熊猫排卵监测提供了一种敏感，特异的检测方法，对大熊猫的繁育有重要的指导意义，解决了上述还没有大熊猫LH胶体金检测技术的缺陷。

一种大熊猫促黄体素胶体金免疫层析试纸条，包括胶条，所述胶条包括顺序搭接的样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜和吸水垫，所述胶体金垫上涂有覆盖有胶体金颗粒标记的鼠抗大熊猫促黄体素β亚基单克隆抗体和兔抗大熊猫促黄体素β亚基多克隆抗体混合液层，所述硝酸纤维素膜上包被有Protein A的质控线，以及包被有兔抗大熊猫促黄体素β亚基多克隆抗体的检测线，所述样品垫上还设置有点样孔。

使用时，在点样孔滴加测试尿液50ul，反应5-10min观察结果；

结果判定：

阳性结果：质控线和检测线都出现红色条带，其中检测线红色越深，LH含量越高；

阴性结果：仅质控线出现一条红色条带；

无效结果：如质控线无条带出现，不论检测线是否出现红色条带结果均判定为无效。