[发明专利]检测阿尔茨海默症标志物的拉曼生物传感器及其制备方法

说明书

本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种检测阿尔茨海默症标志物的拉曼生物传感器，特别涉及一种基于SERS增强来检测阿尔茨海默症两种生物标志物的拉曼生物传感器及其制备方法和应用。本发明提供一种检测tau蛋白和Aβ1‑42低聚体的拉曼生物传感器，其检测过程通过适配体修饰纳米金，显著提高了检测灵敏度。该拉曼生物传感器，包括两条适配体DNA、金纳米粒子、均相反应液。制备的生物传感器，灵敏度高、检测快、重复性好、成本低，且制备方法简单。

技术领域

本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种检测阿尔茨海默症标志物的拉曼生物传感器，特别涉及一种基于SERS增强来检测阿尔茨海默症两种生物标志物的拉曼生物传感器及其制备方法。

背景技术

阿尔茨海默病（AD）是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。65岁以前发病者，称早老性痴呆；65岁以后发病者称老年性痴呆。AD最具特征性的病理改变是细胞外老年斑的形成和细胞内神经元纤维缠结的形成。老年斑主要由β淀粉样蛋白肽Aβ构成，Aβ是一种含有39-42个氨基酸的多肽，由β淀粉样前体蛋白APP经过α、β、γ分泌酶裂解衍生而来的，在AD的发生发展中起着重要作用，Aβ1-42是老年斑的主要成分。Tau蛋白是含量最高的微管相关蛋白，在正常脑中Tau蛋白的细胞功能是与微管蛋白结合促进其聚合形成微管；在阿尔茨海默症中异常磷酸化tau蛋白增加，造成形成神经纤维缠结。

目前报道的检测tau蛋白和Aβ1-42低聚体的方法主要有酶联免疫法（ELISA）、表面等离子体共振、电化学方法等，这些方法往往存在仪器和抗体价格昂贵、操作复杂、灵敏度低、重现性差等问题，因此，目前急需建立一种快速，准确，灵敏且高特异性的检测方法来检测tau蛋白和Aβ1-42低聚体从而来诊断阿尔茨海默症的方法。

发明内容

针对目前缺乏快速，准确，灵敏且高特异性的检测tau蛋白和Aβ1-42低聚体的方法的问题，本发明提供一种检测tau蛋白和Aβ1-42低聚体的拉曼生物传感器，其检测过程通过适配体修饰纳米金，显著提高了检测灵敏度。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种检测阿尔茨海默症标志物的拉曼生物传感器，包括两条适配体DNA、金纳米粒子、均相反应液。

所述的两条适配体DNA序列分别是：

PolyA10-Tau aptamer :5’-AAAAAAAAAATTTTTGCGGAGCGTGGCAGG-3’；

PolyA10-Aβ1-42aptamer :5’-AAAAAAAAAATTTTTGCCTGTGGTGTTGGGGCGGGTGCG-3’。

所述的均相反应液为：1*PBS，目标物以及事先标记好目标物对应的各自DNA适配体的AuNPs；所述的均相溶液中1*PBS 的NaCl终浓度为77.5 mM；所述的目标物为： tau蛋白或/和Aβ1-42低聚体。

上述拉曼生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）将两条适配体DNA各自修饰到金纳米粒子表面；

（2）将修饰后的的纳米金粒子与均相反应溶液混合；

（3）拉曼强度分析。

所述的步骤（1）的具体操作步骤如下：

S1 制备1 nM纳米金溶液，加入拉曼染料4-NTP和适配体DNA，混合均匀后，4 ℃下保存；

S2 搅拌条件下，按照1μL/min的速度将PB缓冲液滴加到步骤S1得到的溶液中，然后1μL/min的速度加入PBS缓冲液，加完后置于4℃保存；