[发明专利]同型半胱氨酸测定试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

本发明涉及一种同型半胱氨酸测定试剂盒及其制备方法和检测方法，该同型半胱氨酸测定试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1为由以下浓度的各组分制备而成的水溶液：磷酸缓冲液、1.8～2.2mL/L的曲拉通X‑100、0.11～0.16g/L的L‑丝氨酸、805～815KU/L的乳酸脱氢酶、0.5～0.75g/L的NADH以及0.8～1.2mL/L的ProcLin300；试剂R2为由以下浓度的各组分制备而成的水溶液：磷酸缓冲液、1.8～2.2mL/L的曲拉通X‑100、0.05～0.10g/L的二水合乙二胺四乙酸二钠盐、0.8～1.2mL/L的ProcLin300、20.0～22.0KU/L的胱硫醚‑β‑合成酶以及10.0～14.0KU/L的胱硫醚‑β‑分解酶。该同型半胱氨酸测定试剂盒通过筛选包含特定配比的各组分分别形成试剂R1和试剂R2，检测下限低，灵敏度高，整体的线性范围宽，稳定性好。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种同型半胱氨酸测定试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

同型半胱氨酸(HomoLysteine，HCY)又称高半胱氨酸，是一种含巯基的氨基酸，为白色结晶，熔点232℃～233℃，能溶于水及乙酸，微溶于醇，不溶于醚，是胱硫醚和蛋白酸转硫化或甲基化代谢旁路中形成的中间产物，是蛋白质生物合成过程中没被正常利用的一种氨基酸前体。HCY在人体主要两种代谢过程，即再甲基化过程和转硫基过程。再甲基化过程：HCY可以再甲基化重新形成蛋氨酸而参加蛋氨酸循环，此过程需维生素B12、甲基转移酶、亚甲基四氢叶酸还原酶、叶酸、甜菜碱及胆碱。转硫基过程：HCY和丝氨酸在胱硫醚合成酶作用下生成胱硫醚，再在胱硫醚酶作用下形成半胱氨酸，然后分解为丙酮酸、硫酸和水。在此过程中，β-胱硫醚合成酶和胱硫酸酶的活性都依靠于维生素B6。

同型半胱氨酸已成为心血管、动脉粥样硬化和中风等疾病诊断的重要因素。关于同型半胱氨酸的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC法)、气相色谱-质谱法(GC-MS法)、酶免疫检测法(ELA法)、荧光偏振免疫检测法(FPLA法)、高效毛细管电泳法和循环酶法。然而，目前常规循环酶法所采用的HCY试剂盒的灵敏性和开盖稳定时间依然有待提升。

发明内容

基于此，有必要针对提供一种灵敏度高且开盖稳定时间长的同型半胱氨酸测定试剂盒及其制备方法和检测方法。

一种同型半胱氨酸测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1为由以下浓度的各组分制备而成的水溶液：

所述试剂R2为由以下浓度的各组分制备而成的水溶液：

在其中一个实施例中，所述试剂R1为由以下浓度的各组分制备而成的水溶液：

所述试剂R2为由以下浓度的各组分制备而成的水溶液：

在其中一个实施例中，所述同型半胱氨酸测定试剂盒还包括校准品，所述校准品选自北京世纪沃德生物技术有限公司生产的HCY校准品，浓度为28μmol/L。

一种上述任一项所述的同型半胱氨酸测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

配制试剂R1：按照上述任一项所述的试剂R1的组成称量各组分，向4/5倍预配制溶液体积的纯化水中加入十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠，搅拌，溶解，调整溶液pH值为7.40±0.1，再依次加入准确称量的曲拉通X-100和Proclin300，混匀，再加入L-丝氨酸，溶解，再依次加入乳酸脱氢酶和NADH，搅拌溶解，加入余量的纯化水定容至预配制体积，混匀，置于2℃～8℃储存；