[发明专利]一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测试剂盒，该试剂盒包括包被了狂犬病毒抗原的毛细管、酶结合物、发光底物和清洗液。本发明检测方法效率高、灵敏性高、特异性强、自动化程度高，操作简单快速且检测范围广、无污染、保存时间长，能有效改善目前市面上产品的不足。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测试剂盒。

背景技术

狂犬病是由狂犬病毒引起的一种传染性强、危害性大、病死率高的人畜共患病，目前尚无可以治愈狂犬病的药物。我国是狂犬病的高发国家，针对狂犬病的措施以预防为主。犬、猫等动物是狂犬病毒的主要储存宿主和传播宿主，因此，对狂犬病流行地区的犬、猫等动物实行强制免疫接种与免疫后抗体效价监测相结合，是防控措施的重要环节。动物体内狂犬病毒中和抗体的高低是衡量疫苗免疫效果的重要指标。

目前，WHO和OIE推荐的用于狂犬病毒抗体检测的方法有快速荧光灶抑制试验（Rapid fluorescent focus inhibition test，RFFIT）、荧光抗体病毒中和试验（Fluorescence antibody virus neutralization test，FAVNT）。近年来，国内外先后报道了多种狂犬病毒抗体检测技术，如流式细胞计数法、间接ELISA技术、竞争ELISA技术、夹心ELISA技术、胶体金层析诊断试纸条技术等。

中国专利公开号为CN101936998B的专利申请公开了一种犬用抗狂犬病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒，中国专利公开号为CN1547027A的专利公开了一种用间接酶免疫吸附试验检测犬狂犬病毒IgG试剂盒及制备方法。以上专利均为ELISA检测方法，用时长，操作自动化程度低。

中国专利公开号为CN1326101A的专利申请公开了一种胶体金免疫层析狂犬病病毒抗体检测试剂条及制备方法，中国专利公开号为CN104360061A的专利申请公开了一种狂犬病病毒IgG抗体免疫金标检测试纸及制备方法。以上专利均为胶体金检测方法，均为定性检测，灵敏度和特异性较低。

RFFIT和FAVNT两种方法虽能准确测定狂犬病毒中和抗体水平，但均需采用活细胞和活病毒进行测定，均需昂贵的实验器材，且检测时间长，因此不适用于大规模的血清检测。ELISA技术、胶体金等方法不能兼顾效率高、灵敏性高、特异性强和自动化程度高等优点，且上样量较大，需要血清样本量大。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，提供一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测方法。此检测方法效率高、灵敏性高、特异性强、自动化程度高，操作简单快速且检测范围广、无污染、保存时间长，能有效改善目前市面上产品的不足。本发明应用于检测动物血清或血浆中狂犬病毒中和抗体的浓度。

为了达到上述技术目的，本发明所采用的技术方案是：

一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括包被了狂犬病毒抗原的毛细管、酶结合物、发光底物和清洗液。

所述狂犬病毒抗原为自身带有活性基团或经过修饰获得活性基团的狂犬病毒G蛋白重组抗原、灭活狂犬病全病毒或狂犬病毒病毒样颗粒。

所述活性基团为氨基、羧基、巯基或羟基。

所述毛细管为高精度毛细管，其外径为1.18±0.02mm，内径为0.7±0.005m、长度为30±1mm；材质为高硼硅3.3玻璃。

所述毛细管上带有氨基、羧基、羟基、巯基、醛基、环氧基、氰酸酯基、异氰酸酯基、氰基、异氰基、马来酰胺氨基、N-羟基琥珀酰亚胺酯基、酚羟基或者酚羟基衍生基团中的一种。

所述包被了狂犬病毒抗原的毛细管通过如下方法制成：该方法包括修饰毛细管步骤，修饰狂犬病毒G蛋白重组抗原、灭活狂犬病全病毒或狂犬病毒病毒样颗粒步骤，包被步骤和封闭步骤；