[发明专利]农杆菌介导的甜椒遗传转化方法

权利要求书

1.一种根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步骤：

(1)提供甜椒外植体；

(2)提供含有目的基因的根癌农杆菌，侵染甜椒外植体3～7min，共培养36～72h，共培养时采用暗培养，培养基中6-苄氨基嘌呤浓度为3～5mg·L-1，α-萘乙酸的浓度为0.15～0.25mg·L^-1，乙酰丁香酮的浓度为小于200mmol/L；

(3)选择培养；培养基中6-苄氨基嘌呤浓度为3～5mg·L^-1，α-萘乙酸的浓度为0.15～0.25mg·L^-1，卡那霉素浓度为45～75mg·L^-1，头孢菌素的浓度为300～500mg·L^-1；

(4)生芽培养：培养基中卡那霉素浓度为45～75mg·L^-1，6-苄氨基嘌呤的浓度为3～5mg·L^-1，α-萘乙酸的浓度为0.15～0.25mg·L^-1，浓度为300～500mg·L^-1的头孢菌素或者浓度为100～300mg·L^-1的特美汀；

(5)生根培养：培养基中α-萘乙酸的浓度为3～5mg·L^-1，6-苄氨基嘌呤的浓度为0.15～0.25mg·L^-1，浓度为300～500mg·L^-1的头孢菌素或者浓度为100～300mg·L^-1的特美汀。

2.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述方法中使用的全部培养基的pH为5.6～6.0。

3.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述方法中使用的培养基都为MS培养基。

4.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述步骤(2)中温度23～26℃，暗培养，培养时间36～72h。

5.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述步骤(3)中温度23～26℃，光照条件1500～2200lux，14-18h/d，培养时间10～17d。

6.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述步骤(4)中温度23～26℃，光照强度1500～2200lux，14-18h/d，培养时间10～17d。

7.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述步骤(5)中温度23～26℃，光照强度1500～2200lux，14-18h/d，培养时间10～17d。

8.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述头孢菌素选自头孢噻吩钠、氨苄青霉素、羧苄青霉素、红霉素、头孢曲松钠中的任意一种或几种。

9.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述步骤(1)还包括对甜椒外植体经过预培养。

10.根据权利要求1所述的根癌农杆菌介导的甜椒遗传转化方法，其特征在于：所述步骤(1)中甜椒外植体采用子叶节顶端的分生组织。