[发明专利]一种调控鱼类生殖内分泌的方法有效
| 申请号： | 201811237248.4 | 申请日： | 2018-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN109295091B | 公开（公告）日： | 2022-06-21 |
| 发明（设计）人： | 黄伟;迟长凤;楼宝;刘慧慧 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 316100 浙江省舟山市普陀区普*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 调控 鱼类 生殖 内分泌 方法 | ||
1.一种调控鱼类生殖内分泌的方法，其特征在于，通过调节PSAT1基因的表达，实现调控GnRH3基因的表达，从而实现鱼类生殖内分泌的调控，所述PSAT1基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，所述方法不涉及疾病的诊断和/或治疗。
2.根据权利要求1所述的一种调控鱼类生殖内分泌的方法，其特征在于，分别建立GnRH3:EGFP转基因斑马鱼模型和cyp19a1a:EGFP转基因斑马鱼模型，研究斑马鱼PSAT1基因与GnRH3之间的调控关系。
3.根据权利要求2所述的一种调控鱼类生殖内分泌的方法，其特征在于，所述GnRH3:EGFP转基因斑马鱼模型的建立方法为：
（1）以大黄鱼基因组DNA为模版，利用引物F/R扩增得到3602bp的DNA片段，所述DNA片段包含2576bp的启动子区域和1026bp的GnRH3基因区域，所述GnRH3基因区域包括5’-UTR区、三个内含子和四个外显子区域；
（2）利用Hind III和BamH I酶切位点，将步骤（1）所得的DNA片段克隆入pEGFP-1载体上；
（3）提取质粒纯化后显微注射斑马鱼受精卵，经传代筛选获得GnRH3:EGFP转基因斑马鱼。
4.根据权利要求2所述的一种调控鱼类生殖内分泌的方法，其特征在于，所述cyp19a1a:EGFP转基因斑马鱼模型的建立方法为：
（1）以鮸鱼基因组DNA为模版，利用引物扩增得到3811bp的DNA片段，所述DNA片段包含1777bp的启动子区域和2034bp的cyp19a1a基因区域，所述cyp19a1a基因区域包括5’-UTR区、两个内含子和三个外显子区域；
（2）利用Hind III和Xho I酶切位点，将步骤（1）所得的DNA片段克隆入pEGFP-1载体上；
（3）提取质粒纯化后显微注射斑马鱼受精卵，经传代筛选获得cyp19a1a:EGFP转基因斑马鱼。
5.根据权利要求2所述的一种调控鱼类生殖内分泌的方法，其特征在于，所述研究斑马鱼PSAT1基因与GnRH3之间的调控关系，包括以下步骤：
（1）对斑马鱼PSAT1基因进行分子结构分析；
（2）对斑马鱼PSAT1基因的表达模式进行研究；
（3）斑马鱼PSAT1多克隆抗体的制备及纯化；
（4）斑马鱼PSAT1 morpholino敲降的研究。
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