[发明专利]一种检测血清/血浆中肌酸激酶同工酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测血清/血浆中肌酸激酶同工酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法。本发明的检测血清/血浆中肌酸激酶同工酶的化学发光定量检测试剂盒，包括：1)链霉亲和素包被的磁微粒；2)生物素标记的肌酸激酶同工酶抗体；3)吖啶酯标记的肌酸激酶同工酶抗体；4)校准品与质控品；所述校准品与质控品各含高、低两个浓度点。本发明提供的一种检测血清/血浆中肌酸激酶同工酶的化学发光定量检测试剂盒，采用双抗体夹心法的原理，同时利用亲和素‑生物素体系，采用吖啶酯化学发光，大大提高了试剂盒的检测灵敏度，减少反应时间，降低试剂成本。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测血清/血浆中肌酸激酶同工酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

肌酸激酶CK是由两个亚基组成的二聚体，分别由位于14和19号染色体不同基因编码的M和B两个亚基构成，可以组成3种同工酶，分别为CKMM、 CKMB和CKBB，其中混合单体的肌酸激酶同工酶主要来源于心肌(心肌中CK-MB占CK总量的15％～25％)。这三种同工酶分子量相同，催化相同的化学反应，但其分子结构和来源不同。

肌酸激酶CK是一个大的二聚体蛋白质，其中M亚基具有一个小的N-末端结构和一个大的C-末端结构；M型亚基由387个氨基酸残基组成，分子量为 43kDa左右，分子内有8个巯基，但无二硫键。天然的肌酸激酶是一个紧密的球状结构，近来关于肌酸激酶构象变化和活力变化关系的研究显示了酶分子活性部位构象的柔性，即酶分子活性部位的微区构象在变性剂作用下易发生改变而导致酶分子快速失活，此时酶分子整体构象尚未发生明显变化。

血清中CK-MB含量的测定可以辅助诊断心肌损伤。心肌梗塞(AMI)并伴有胸痛的患者，心肌损伤发作3～8小时后出现CK-MB含量升高，12～24h时达到高峰浓度，24～48h内通常恢复到基准水平。这种上升而后迅速下降的模式是表现心肌梗塞的典型模式，但在某些情况下，心肌梗塞可能作为并发症出现，因此监测病人的CK-MB水平有助于早期发现心肌梗塞情况。

除心肌梗塞外，冠状动脉旁路手术、瓣膜替换术或先天性缺损修复术等心脏手术也可能导致血清中CK-MB含量升高，但不表现出心肌梗塞的典型模式。骨骼肌损伤、皮肌炎、雷依氏综合征、横纹肌损伤或慢性酒精中毒等情况也可能导致血清中CK-MB含量升高。

目前用于检测肌酸激酶同工酶的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法和化学发光免疫分析法。酶联免疫分析法采用碱性磷酸酶标记抗体，用于催化发光底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定性长等特点，但试剂的检测灵敏度较低。化学发光免疫分析法采用催化剂催化化学发光物质形成一种激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时，发出光子，具有操作简单，自动化程度高，检测速度快等优点。

目前市售的肌酸激酶同工酶检测试剂盒主要分为以下2种：一是Elisa方法即辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记一株肌酸激酶同工酶抗体，固相载体(微孔板或固相微粒)包被另一株肌酸激酶同工酶抗体，利用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶催化发光底物产生颜色变化，检测血清或血浆中肌酸激酶同工酶的浓度；二是三联吡啶钌电化学发光法，采用链霉亲和素磁珠，一株肌酸激酶同工酶抗体标记生物素，另一株肌酸激酶同工酶抗体标记三联吡啶钌，经过免疫反应形成磁珠-链霉亲和素-生物素-肌酸激酶同工酶抗体-肌酸激酶同工酶-肌酸激酶同工酶抗体-三联吡啶钌复合物，在电场加压条件下发光。

以上定量检测肌酸激酶同工酶的方法存在以下缺陷：1)ELISA方法采用微孔板作为固定性，包被密度有限，灵敏度较低，反应时间较长；2)采用三联吡啶钌的电化学发光法，仪器要求较高，试剂及仪器昂贵。

发明内容

本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种检测血清/血浆中肌酸激酶同工酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：