[发明专利]一种测定吸烟者尿液中尼古丁和可替宁的方法

权利要求书

1.一种测定吸烟者尿液中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）标准工作曲线的建立：配制标准工作液和内标工作液，并以实际尿液样品为基质进行混合标准溶液的配制，利用UPLC-MS/MS分析并建立标准工作曲线；

（2）收集尿液样品，利用甲醇和水调节尿液的稳定性，尿液样品中甲醇的体积浓度为30～95%；

（3）将步骤（2）调节后的尿液样品过滤，利用UPLC-MS/MS对尿液样品进行检测，根据步骤（1）建立的标准曲线计算吸烟者尿液样品中尼古丁和可替宁含量；

步骤（1）包括如下具体步骤：

a、标准工作液的配制：准确称取尼古丁和可替宁标准品各0.1 g于100 mL的2个容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得到1.0 mg/mL的混合标准溶液；使用时用甲醇稀释成0.01mg/mL的标准工作液；

b、内标工作液的配制：准确称取d⁴-尼古丁和d³-可替宁标准品各0.05 g于100 mL的2个容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得到5.0 mg/mL的内标工作液；

c、标准工作曲线的绘制：分别取7份尿液平行样品于7个容量瓶中，每份1.0 mL，分别加入1.0 mL的内标工作液和3.0 mL的水，然后再分别加入 0.0 mL、0.02 mL、0.05 mL、0.1mL、0.5 mL、1 mL、2 mL的0.01 mg/mL的标准工作液，用甲醇定容至10mL，其中尿液样品中甲醇的体积浓度为60%，摇匀、过滤，利用UPLC-MS/MS测定分析并建立标准工作曲线；

步骤（3）中UPLC-MS/MS的条件为：

液相色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEHHILIC液相色谱柱，50* 2.1 mm,1.7 µm；流动相为内含0.1%氨水的60 %的甲醇水溶液，上述%是基于体积比；流速：0.5 mL/min；进样体积：5.0 µL；柱温：30 ℃；

质谱条件：质谱电离方式为ESI正离子模式，多级反应监测描方式，电喷雾电压：5000V；雾化气压力：348 kPa；气帘气压力：209 kPa；辅助加热气压力：348 kPa；脱溶剂温度：500℃；碰撞电压：28 V；去簇电压：30 V；驻留时间：100 ms；尼古丁的定量离子对为：m/z 163.1和117.2；d⁴-尼古丁的定量离子对为：m/z 167.1和121.2；可替宁的定量离子对为：m/z 177.2和80.2；d³-可替宁的定量离子对为：m/z 180.2和83.2。

2.根据权利要求1所述的测定吸烟者尿液中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于，步骤（2）中尿液样品的前处理包括：采集吸烟者尿液样品后，及时准确移取1.0 mL的样品于萃取瓶中，加入1.0 mL的内标工作液，3.0 mL的水，再用甲醇定容至10 mL。