[发明专利]化妆品12种直接染料的高效液相色谱同时分离检测方法

权利要求书

1.化妆品中12种直接染料的高效液相色谱同时分离检测方法，其特征在于, 所述的12种直接染料为直接红80、直接蓝6、直接蓝1、直接紫48、直接红81、直接红23、直接红28、直接橙39、直接棕95、直接黑51、直接黄12、直接黑38；所述的检测方法包括如下步骤：

a、制备混合标准储备液和混合标准工作溶液，所述混合标准储备液为浓度从490 mg/L到4077 mg/L混合标准储备液，混合标准工作液为从0.245 mg/L到408 mg/L之间的8个系列混合标准工作溶液；

b、制备待测样品溶液：若化妆品样品为膏状、粉状固体样品以及指甲油，则加入三氯甲烷涡旋溶解分散样品，随后加入0.02 mol/L的乙酸铵溶液,pH=9.0,液液萃取5 min，离心后，取上层水相溶液过膜，滤液供液相色谱测定；若样品为水状液体样品，加入0.02 mol/L的乙酸铵溶液,pH=9.0,稀释定容至10 mL，混匀，过膜，滤液供液相色谱测定;

c、所用仪器为高效液相色谱仪，检测器为光电二极管阵列检测器,色谱柱为反相C18柱，柱温为35±1 ℃，选择625nm作为直接蓝6、直接蓝1、直接黑51、直接黑38的检测波长，选择404nm作为直接黄12的检测波长；选择508nm作为直接红80、直接紫48、直接红81、直接红23、直接红28、直接橙39、直接棕95的检测波长;流动相A为乙腈，流动相B为0.02 mol/L 乙酸铵水溶液；洗脱梯度程序: 0 ～ 3 min，3%A；3 ～ 15 min，3% ～ 30%A；15 ～ 30 min，30% ～ 38%A；30 ～ 35 min，38%～ 60%A；35.0 ～ 35.1 min，60%～ 3%A；35.1 ～ 40min，3%A；流速：1. 0 mL /min；进样量：20 μL;

d、标准曲线的绘制：将12种直接染料的系列混合标准工作溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤c的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线;

e、结果分析：取步骤b中滤液注入高效液相色谱仪中，在步骤c的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据步骤d中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中各直接染料的含量。

2.根据权利要求1所述化妆品中12种直接染料的高效液相色谱同时分离检测方法，其特征在于，步骤a中所述混合标准储备液的配制具体步骤为：准确称取适量各染料标准品，置于100 mL容量瓶中，用0.02mol/L 乙酸铵水溶液,pH=9.0,溶解并定容至刻度，配制成490mg/L到4077 mg/L混合标准储备液；步骤a中所述混合标准工作溶液的配制具体步骤为：将混合标准储备液采用逐级稀释的方法，用0.02mol/L乙酸铵水溶液,pH=9.0,配制浓度从0.245 mg/L到408 mg/L之间的8个系列混合标准工作溶液; 混合标准储备液和系列混合标准工作溶液均置于冰箱中0 ℃ ~ 4 ℃温度下保存。

3.根据权利要求1所述化妆品中12种直接染料的高效液相色谱同时分离检测方法，其特征在于，步骤b中所述待测样品溶液的制备具体步骤为：

1）、样品为膏状、粉状固体以及指甲油：称取试样1.0 g,精确至0.0001 g,于50 mL螺纹盖离心管中,口红膏状样品用玻璃棒均匀涂抹在离心管底部，加入25 mL的三氯甲烷涡旋溶解分散样品，随后加入0.02 mol/L的乙酸铵溶液,pH=9.0,10 mL液液萃取5 min，经10000r/min离心5 min后，取上层水相溶液过0.20μmPTFE滤膜，滤液供液相色谱测定;

2）、样品为水状液体：称取试样1.0 g,精确至0.0001 g,于25mL具塞比色管中，用0.02mol/L的乙酸铵溶液,pH=9.0,稀释定容至10 mL，混匀，过0.20 μmPTFE滤膜，滤液供液相色谱测定。

4.根据权利要求1所述化妆品中12种直接染料的高效液相色谱同时分离检测方法，其特征在于，步骤c中所述反相C18色谱柱规格为150 mm×4.6 mm内径，颗粒粒径5 μm。