[发明专利]一种人肌钙蛋白I的超敏定量测定试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及一种人肌钙蛋白I的超敏定量测定试剂盒及其检测方法。本申请的试剂盒包含表面上结合有第一抗人肌钙蛋白I单抗的磁微粒、表面上结合有第二抗人肌钙蛋白I单抗的磁微粒；以及酶标记的第三抗人肌钙蛋白I单抗和/或酶标记的第四抗人肌钙蛋白I单抗，其中所述第一、第二、第三和第四单抗分别特异于人肌钙蛋白I的不同表位。本申请还提供了人肌钙蛋白I的磁微粒酶促化学发光免疫检测方法。所述方法采用多种不同抗体，形成磁颗粒‑抗体‑抗原‑酶标抗体的免疫夹心复合物，然后通过化学发光法检测人肌蛋白I。与现有技术相比本发明的试剂盒和方法具有更高的检测灵敏度和特异性。

本申请是申请号为201510590529.8，申请日为2015年9月16日，发明名称为“一种人肌钙蛋白I的超敏定量测定试剂盒及其检测方法”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及临床检验领域，尤其是涉及一种测定人肌钙蛋白I(Troponin I)含量的试剂盒及其测试方法。

背景技术

人肌钙蛋白由肌钙蛋白I、T、C三亚基构成，和原肌球蛋白一起通过调节钙离子对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。肌钙蛋白I(TnI)是横纹肌的一种关键调节蛋白。尽管所有横纹肌TnI的功能都相同，但心肌TnI(cTnI，分子质量23.9kD)与骨骼肌TnI明显不同。

由于组织特异性高，心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌损伤的高敏感性标志物。cTnI还可用于鉴别骨骼肌损伤(如横纹肌溶解、多发性损伤和非心脏手术)和心肌损伤。cTnI已经明确是急性冠状动脉综合征(ACS)患者的预后标志物，可以预测近期、中期甚至长期预后。

cTnI和cTnT已确定是预测ACS后果的最佳独立标志物。欧洲心脏病协会(ESC)和美国心脏病学会(ACC)联合对心肌梗死(MI)进行了重新定义。根据此定义，在临床急性缺血的情况下，当血中cTnI水平高于参考范围(健康人群)99百分位值时，即可诊断为MI。同时要求肌钙蛋白检测方法的不精密度(变异系数)≤10％。根据以上规定，如果一种检测方法在CV小于10％的前提下，可以测量到99％分位或更低的数值，我们就可以称之为超敏肌钙蛋白。应用第99百分位数参考上限时，其临界值为0.02ng/ml，而在CV≤10％时，最低测量值至少应不大于0.015ng/ml。

根据MI的重新定义，已经发表了许多关于心肌肌钙蛋白检测在ACS患者中的作用的建议。在UAP和非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者中，检测到的心肌肌钙蛋白水平与高死亡率有关。因此，肌钙蛋白的检测对这些患者的危险分级非常有用，也是ACC/AHA(美国心脏病学会)对UAP和NSTEMI患者处理导则的一部分。cTn具有相当长的诊断窗口期(cTnI 7至9天，cTnT更长)，因此很快检测出结果很重要。从检测角度上来说，目前临床上用于测定cTnI的方法主要有放免法、胶体金免疫层析法、ELISA法、化学发光法等。化学发光法检测时间短、灵敏度高、准确性高。

磁微粒酶促化学发光检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的。磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少等优点。

发明内容

因此，根据本申请的一方面，提供一种肌钙蛋白I的检测试剂盒，其包含：表面上结合有第一抗cTnI单克隆抗体的磁微粒；表面上结合有第二抗cTnI单克隆抗体的磁微粒；酶标记的第三抗cTnI单克隆抗体；和/或酶标记的第四抗cTnI单克隆抗体，其中所述第一、第二、第三和第四单克隆抗体分别特异于人肌钙蛋白I的不同表位。

在具体的实施方式中，第一和第二抗cTnI单克隆抗体共价结合至磁微粒的表面。在具体的实施方式中，第一和第二抗cTnI单克隆抗体可以结合到同一磁微粒上，也可以分别结合至不同的磁微粒上。在具体的实施方式中，第一和第二抗cTnI单克隆抗体各自独立地包被到磁微粒上。