[发明专利]一种迟缓爱德华氏菌微球口服疫苗及制备方法

说明书

本发明公开了一种迟缓爱德华氏菌微球口服疫苗及制备方法，该疫苗是灭活迟缓爱德华氏菌包覆有海藻酸钙得到的微球。本发明的疫苗，微球的粒径为4.64μm‑28.38μm，平均粒径16.51μm，其粒径较小，海藻酸钙对的灭活迟缓爱德华氏菌的包覆率在91.04％‑96.5％，微球在模拟的胃液中稳定，在肠液中释放，表现出良好的缓释性；该微球疫苗的使用，可显著提高鱼体的血清效价和巨噬细胞的吞噬活性和吞噬指数，最高免疫保护率可达77.33％。该口服疫苗可有效激活鱼体免疫反应，预防鱼类疾病发生。本发明的方法工艺较为简单，成本较低，有利于工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种海水鱼类迟缓爱德华氏菌微球口服疫苗及制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

近年来，海水工厂化养殖规模迅速扩大，生产集约化程度不断提高。病害成为制约海水工厂化养殖业健康发展的瓶颈。据统计，由于病害的发生给海水工厂化养殖业造成的损失每年高达百亿元。迟缓爱德华氏菌是一种革兰氏阴性病原菌，在海水养殖鱼类中感染极其广泛。其显著特征是可以在不同的宿主细胞中生存和繁殖，能够躲避细胞内吞作用，在细胞质中复制。迟缓爱德华氏菌的感染和爆发给海水养殖鱼类造成较大的经济损失。

水产动物疾病控制目前主要以药物防治为主。生产上使用的渔药大部分由兽药、农药移植而来，缺乏药代动力学、毒理学及对养殖生态环境的影响等基础理论研究，滥用错用渔药的现象十分普遍。长期滥用药物不仅使药物的效果受到了限制，还可诱发病原微生物产生抗药性，最后导致“无药可用”。同时，药物还可以在养殖动物体内残留和对养殖环境造成进一步的污染。随着人们对食品安全和环境安全的重视，消除水产品药物残留隐患的抗病技术研究已显得尤为重要。疫苗作为抗生素的替代品，可使鱼类高特异抵御病原的攻击，减少鱼类病害的发生，保护生态环境。

鱼类疫苗根据免疫方式的不同分为注射疫苗，口服疫苗和浸泡疫苗。目前所开发的关于迟缓爱德华氏菌的疫苗均为注射疫苗。由于鱼类水生的特点和群体数量大，很难像畜产动物一样采用注射方法接种疫苗。浸泡方式对疫苗的需求量大，且免疫保护率低。鱼类口服疫苗具有使用方便，安全性好，鱼群应激小，适于规模化及重复免疫等特点。因此近年来，口服疫苗成为鱼类疫苗接种方式的第一选择。但是与注射疫苗相比，鱼类口服疫苗容易受到鱼类胃酸性环境及肠内消化酶的破坏，使得疫苗到达肠粘膜之前被大量降解，从而免疫效果较差。

近年来，国内外学者先后利用各种聚合物作为鱼类口服疫苗传递介质开展研究。2008年，孙金生等利用喷涂技术将聚乙烯醇等聚合物包裹疫苗制备成疫苗微丸作为口服疫苗使用，2014年，张振国等利用喷涂技术将丙烯酸树脂等包裹疫苗该口服疫苗制备疫苗微丸。这些口服疫苗在聚合物的保护下可以顺利通过鱼体胃部的酸性环境，保护抗原完整到达肠道，但是该口服疫苗在肠道容易出现突释现象，不能达到很好的免疫效果。

海藻酸钠(C₆H₇O₈N_a)_n是由α-L-甘露糖醛酸(M单元)与β-D-古罗糖醛酸(G单元)依靠1,4糖苷键连接而成的线性共聚物。海藻酸钠粉末遇水变湿，可缓慢溶解。海藻酸盐可通过其古罗糖酸的钠离子与二联阳离子(Ca²⁺)交换而瞬时凝胶化成球。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种可用于海水养殖由迟缓爱德华氏菌引起的疾病的免疫预防的迟缓爱德华氏菌微球口服疫苗。

本发明的第二个目的是提供一种迟缓爱德华氏菌微球口服疫苗的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种迟缓爱德华氏菌微球口服疫苗，是灭活迟缓爱德华氏菌包覆有海藻酸钙得到的微球。

迟缓爱德华氏菌优选为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)GX-1，其保藏号为CCTCC NO：M2018379。