[发明专利]一种软骨细胞引物层的制备方法及软骨组织

说明书

本发明涉及软骨组织工程领域，具体而言，涉及一种软骨细胞引物层的制备方法及软骨组织。一种软骨细胞引物层的制备方法，将载体和自体软骨细胞进行三维动态共培养，即得；所述三维动态共培养的培养条件包括：36.5～37.5℃，4.5～5.5％CO₂，9～11％O₂；所述三维动态共培养的培养体系中包括9～12ng/mL碱性成纤维细胞生长因子；在所述三维动态共培养前，所述初代自体软骨细胞在所述载体中的密度为1.6～2.0×10⁵/cm²；所述载体包括骨水泥；所述三维动态共培养的培养体系的组成包括：DMEM培养基、4～5mM L‑谷氨酰、体积分数为9～11％的血清和双抗生素。制得的软骨细胞引物层利于与自体软骨细胞融合，具有较好的生物相容性。

技术领域

本发明涉及软骨组织工程领域，具体而言，涉及一种软骨细胞引物层的制备方法及软骨组织。

背景技术

人体软骨在运动型损伤和各种关节炎发生后不能自身自然修复，因此，人工培育软骨组织对于改善老年人生活质量，延长运动员职业生涯有着不可替代的作用。人工软骨其实分为两种：一种不含软骨细胞，这是目前研究较多的；另一种则不仅含软骨细胞，且包含软骨细胞培养支架体系，可称为组织工程化人工软骨。组织化工程人工软骨至今没有商业化产品。

目前研究较多的人工软骨类型，这类人工软骨植入材料主要分为两类，即人工合成的材料和天然生物材料，具体而言，天然生物材料生物相容性好，但缺乏一定的机械强度，难于塑形。人工材料的软骨假体虽然在一定程度上能起到替代软骨的作用，但还存在易磨损松动、界面润滑性差、缺乏生物活性等等不足，其性能有待进一步提高。而组织工程软骨相容性高，具有更明显的优势，也更适合患者。但价格昂贵是患者无法接受的，在国外，拇指盖大小的软骨球，售价在650美元，限制了组织工程软骨在国内的开展与应用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种软骨细胞引物层的制备方法，其将载体和自体软骨细胞进行三维动态共培养，即得。制得的软骨细胞引物层利于与自体软骨细胞融合，具有较好的生物相容性。

本发明的第二目的在于提供一种基于人自体细胞的软骨组织，可以在同样费用的条件下培养成本更低的软骨组织，同时具有较好的生物相容性，满足患者的需求。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种软骨细胞引物层的制备方法，将载体和自体软骨细胞进行三维动态共培养，即得；

所述三维动态共培养的培养条件包括：36.5～37.5℃，4.5～5.5％CO₂，9～11％O₂；

所述三维动态共培养的培养体系中包括10ng/mL碱性成纤维细胞生长因子；

在所述三维动态共培养前，所述自体软骨细胞在所述载体中的密度为1.6～2.0×10⁵/cm²；

所述载体包括骨水泥；

所述三维动态共培养的培养体系的组成包括：DMEM培养基、4～5mML-谷氨酰、体积分数为9～11％的血清和双抗生素。

一种基于人自体细胞的软骨组织，由上述的方法制备得到的软骨细胞引物层和连接于其上的自体软骨组织组成；

所述软骨细胞引物层用于连接骨和所述自体软骨组织。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明是基于人自体细胞培育的可移植用人组织工程软骨，不是人工软骨，与人体有更好的适应性。

(2)技术操作上来说，本发明是自体细胞培育，非干细胞培育，不存在患者出现排斥反应等情况。