[发明专利]一种软骨细胞引物层的制备方法及软骨组织

权利要求书

1.一种软骨细胞引物层的制备方法，其特征在于，将载体和初代自体软骨细胞进行三维动态共培养，即得；

所述三维动态共培养的培养条件包括：36.5～37.5℃，4.5～5.5％CO₂，9～11％O₂；

所述三维动态共培养的培养体系中包括9～12ng/mL碱性成纤维细胞生长因子；

在所述三维动态共培养前，所述初代自体软骨细胞在所述载体中的密度为1.6～2.0×10⁵/cm²；

所述载体包括骨水泥；

所述三维动态共培养的培养体系的组成包括：DMEM培养基、4～5mM L-谷氨酰、体积分数为9～11％的血清和双抗生素。

2.一种基于人自体细胞的软骨组织，其特征在于，由权利要求1所述的方法制备得到的软骨细胞引物层和连接于其上的自体软骨细胞组成；

所述软骨细胞引物层用于连接骨和所述自体软骨组细胞。

3.根据权利要求2所述的软骨组织，其特征在于，将所述软骨细胞引物层和培养后的自体软骨细胞共培养得到所述人工软骨组织；

优选地，所述软骨细胞引物层和培养后的自体软骨细胞共培养为三维动态培养，所述三维动态培养的培养条件包括36.5～37.5℃，4.5～5.5％CO₂，9～11％O₂。

4.根据权利要求3所述的软骨组织，其特征在于，所述培养后的自体软骨细胞由自体软骨细胞经三维静态培养后得到；

优选地，所述三维静态培养为将初代自体软骨细胞和水凝胶共培养。

5.根据权利要求3所述的软骨组织，其特征在于，所述初代自体软骨细胞和水凝胶共培养的方法包括：将所述初代自体软骨细胞和水凝胶前体溶液混合后，加入胶凝液，形成软骨细胞和水凝胶复合体，培养后分离出软骨细胞；

优选地，所述混合时，所述初代自体软骨细胞的接种密度为0.8×10⁶～1.2×10⁶/mL；

优选地，所述水凝胶在所述水凝胶前体溶液中的质量体积浓度为1.1％～1.3％。

6.根据权利要求5所述的软骨组织，其特征在于，所述水凝胶包括海藻酸基水凝胶；

优选地，所述水凝胶前体溶液包括藻酸钠溶液或藻酸钙溶液；

优选地，所述胶凝液为包括二价阳离子的溶液；所述二价阳离子选自钙、铜或锌的一种或多种；

优选地，所述二价阳离子为钙；

优选地，所述二价阳离子在所述凝胶液中的摩尔浓度为90～110mmol/L。

7.根据权利要求5所述的软骨组织，其特征在于，所述分离出软骨细胞的方法包括：清洗后，使用胶原蛋白酶消化，离心即得。

8.根据权利要求3所述的软骨组织，其特征在于，所述三维静态培养的培养体系中还包括9～11ng/mL转化生长因子β，90～110ng/mL胰岛素样生长因子I；

优选地，所述三维静态培养的培养体系中还包括240～260μg/mL L-抗坏血酸2磷酸钠。

9.根据权利要求8所述的软骨组织，其特征在于，所述三维静态培养的培养体系的组成包括：DMEM培养基、4～5mM L-谷氨酰、体积分数为9～11％的血清和抗生素。

10.根据权利要求3～9任一项所述的软骨组织，其特征在于，所述软骨细胞引物层和培养后的自体软骨组织共培养所用的培养体系与所述三维静态培养的培养体系相同。