[发明专利]长链非编码RNA-NKILA在骨组织损伤修复中的应用有效
| 申请号： | 201811177666.9 | 申请日： | 2018-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN109136228B | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 林俊堂;朱鑫星;于金金;钟根深;杨芬;冯岩岩 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 广州骏思知识产权代理有限公司 44425 | 代理人： | 潘雯瑛 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 长链非 编码 rna nkila 组织 损伤 修复 中的 应用 | ||
1.一种过表达载体pLV-NKILA在制备骨组织损伤修复的试剂中的用途，其特征在于：所述过表达载体由NKILA基因片段与慢病毒空载体pLV构建而成；所述的NKILA基因片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 2所示，所述的慢病毒空载体pLV的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 3所示。
2.权利要求1所述的用途，其中所述过表达载体pLV-NKILA的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：采用限制性内切酶BamH I和Xba I分别对慢病毒载体pLV以及NKILA基因片段进行双酶切，并采用T4 DNA连接酶体系对酶切后的NKILA基因片段以及线性慢病毒载体pLV进行连接反应，然后转化感受态细胞，筛选阳性菌落，提取阳性菌落的质粒，得到所述的过表达载体pLV-NKILA。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述NKILA基因片段的制备方法，包括以下步骤：依据长链非编码RNA-NKILA的核苷酸序列，采用DNA合成仪，根据固相亚磷酰胺三酯法原理对NKILA基因片段进行双链合成，同时在其5’末端和3’末端上分别添加BamH I和Xba I酶切位点，得到含有特异性酶切位点的NKILA基因片段。
4.一种诱导型细胞在用于骨组织损伤修复的试剂中的用途，其特征在于：所述诱导型细胞由权利要求1所述的过表达载体pLV- NKILA转染HEK293T细胞构建而成。
5.权利要求4所述的用途，其中所述诱导型细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：采用脂质体转染试剂，将过表达载体pLV- NKILA以及慢病毒包装质粒pSPAX2、pMD2G共同转染到包装细胞中，经培养后收集慢病毒上清液；然后将慢病毒上清液加入到细胞载体中，经培养后得到稳定表达长链非编码RNA-NKILA的诱导型细胞。
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