[发明专利]半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)将活的松材线虫配置成松材线虫悬浮液；(2)选取半年生马尾松苗梢头下3～5cm处的嫩梢部位，拔去针叶，然后在拔去针叶的马尾松嫩梢表皮处纵划两条或以上的伤口；(3)用封口膜在拔去针叶的部位围成不漏水的小漏斗；其中小漏斗的下方紧贴马尾松嫩梢处且与伤口下方齐平；(4)将松材线虫悬浮液注入到小漏斗中进行松材线虫的接种；(5)将接种松材线虫后的半年生马尾松苗放置于室外环境条件下进行培育。利用本发明的方法适用于人工接种松材线虫于半年生的马尾松苗木，能有效降低生产成本，具有广阔的应用前景和重要的生产意义。

技术领域

本发明涉及马尾松苗人工接种松材线虫技术，特别涉及一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法及其应用。

背景技术

马尾松是中国重要的用材林树种，用途广泛，广泛种植在中国17个省区。其中有多个省份发生松材线虫病，给林业生产带来较大的经济损失。栽种马尾松抗病品系是防治该病的根本措施。由于中国发生松材线虫面积较大，各地生态条件差别较大，根据适地适树原则和基因对基因假说(Flor,1971)，各地应该栽种适合当地的抗松材线虫病松树苗木。尽早完成生产用苗对松材线虫病的抗性评价，将节约生产成本。马尾松抗松材线虫病评价的关键技术之一是接种技术。目前“截枝套管法”接种松材线虫技术，适合评价一年以上长出木质化侧枝的马尾松苗对松材线虫病的抗性(王玉嬿等，1985)。“皮接法”适合苗木地径大于5mm的苗木，且操作复杂，对苗木伤害较大(陈玉惠等，2006；吴小芹等，2008；贲爱玲等，2012)。而一般一年生以上的马尾松苗才具有木质化侧枝和5mm地径。对于半年生马尾松苗松材线虫接种技术，仅见一例报道，该报道中因研究基因表达变化，只接种180min，苗木没有发病(徐亮等，2014)，因此该接种方法能否致病，还需要验证。因此到到目前，未见生产上急需的成功的半年生的马尾松苗接种松材线虫的方法报道。因此，建立一种能够成功在半年生马尾松苗木上接种松材线虫的方法，具有广阔的应用前景和重要的生产意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法。

本发明的另一目的在于提供所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，包括如下步骤：

(1)将活的松材线虫配置成松材线虫悬浮液；

(2)选取半年生马尾松苗梢头下3～5cm处的嫩梢部位，拔去针叶，然后在拔去针叶的马尾松嫩梢表皮处纵划两条或以上的伤口；

(3)用封口膜在拔去针叶的部位围成不漏水的小漏斗；其中小漏斗的下方紧贴马尾松嫩梢处且与伤口(切口)下方齐平；

(4)将步骤(1)中配置的松材线虫悬浮液注入到步骤(3)中围成的小漏斗中，以接种松材线虫；

(5)将步骤(4)中接种松材线虫后的半年生马尾松苗放置于室外环境条件下进行培育，每隔半天在小漏斗中补加水。

步骤(1)中所述的松材线虫为采用常规方法培养得到的松材线虫。

步骤(1)中所述的松材线虫悬浮液的浓度为500～5000条/200微升；优选为3000～5000条/200微升；更优选为3000条/200微升。

步骤(2)中所述的半年生马尾松苗为采用常规方法培育的健康的半年生马尾松苗。

步骤(2)中所述的伤口的长度优选为1.5±0.2cm，伤口的深度为0.5～1mm。

步骤(2)中所述的纵划的伤口优选为2～3条；更优选为2条。