[发明专利]半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法及其应用

权利要求书

1.一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将活的松材线虫配置成松材线虫悬浮液；

(2)选取半年生马尾松苗梢头下3～5cm处的嫩梢部位，拔去针叶，然后在拔去针叶的马尾松嫩梢表皮处纵划两条或以上的伤口；

(3)用封口膜在拔去针叶的部位围成不漏水的小漏斗；其中小漏斗的下方紧贴马尾松嫩梢处且与伤口下方齐平；

(4)将步骤(1)中配置的松材线虫悬浮液注入到步骤(3)中围成的小漏斗中，以接种松材线虫；

(5)将步骤(4)中接种松材线虫后的半年生马尾松苗放置于室外环境条件下进行培育，每隔半天在小漏斗中补加水；

步骤(1)中所述的松材线虫悬浮液的浓度为3000～5000条/200微升；

步骤(2)中所述的伤口的长度为1.5±0.2cm，伤口的深度为0.5～1mm；

步骤(4)中所述的松材线虫悬浮液中的松材线虫的条数为3000～5000条。

2.根据权利要求1所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，其特征在于：

步骤(5)中所述的水为双蒸水或无菌水；

步骤(5)中所述的补加水的次数为3～4次。

3.根据权利要求1所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，其特征在于：

步骤(3)中所述的小漏斗的上口直径为1.5cm。

4.根据权利要求1所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，其特征在于：

步骤(5)中所述的室外环境的温度为20～40℃；

步骤(5)中所述的培育的时间为7～21天。

5.根据权利要求1所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，其特征在于，在步骤(4)之后还包括如下步骤：

将无菌水滴入保鲜袋中，然后套在马尾松苗上，盖过接种部位，以保持湿润环境。

6.根据权利要求1所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法，其特征在于，在步骤(5)之后还包括如下步骤：

每天观察发病症状，统计发病率，并用贝曼漏斗法分离松材线虫，记录发病马尾松体内的松材线虫数量。

7.权利要求1～6任一项所述的半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法在半年生马尾松苗接种松材线虫，筛选抗性松树苗木，或马尾松苗抗性评价中的应用。