[发明专利]猪流行性腹泻病毒变异毒株及其在制备高免卵黄抗体中的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒变异毒株及其在制备高免卵黄抗体中的应用。该猪流行性腹泻病毒命名为HeN2010，保藏编号为CGMCC NO.15799；保藏时间是2018年7月5日；保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。本发明制备的高免卵黄抗体，可有效预防和治疗由猪流行性腹泻病毒感染所造成的新生仔猪的腹泻以及死亡，大大提高新生仔猪的存活率，减少养殖业的损失。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒变异毒株及其在制备高免卵黄抗体中的应用。

背景技术

2010年底，中国暴发了猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)，此次流行的PED主要侵害1周龄内仔猪，造成感染仔猪呕吐、腹泻、继而脱水和急性死亡。与此同时，亚洲的大部分国家也出现了大规模PED暴发的报道，紧随其后，欧美的很多国家也遭受了这场风暴，此次PED的流行截至目前仍未得到有效控制，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。

引起PED的病原为PEDV(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)，属于冠状病毒科冠状病毒属α冠状病毒，该病毒属于单股正义RNA病毒，基因组全长约28Kb，至少编码7个开放阅读框，编码顺序为5’UTR-ORF1a-ORF1b-S-ORF3-E-M-N-3’UTR，病毒粒子直径约为95nm～190nm，囊膜上有花瓣状纤突，长18nm～23nm，由核心向四周呈放射状。

目前流行的PEDV已经被证实为新的变异毒株，传统的如CV777之类的疫苗不能够提供完全匹配的保护，而研究以变异毒株为基础的疫苗，尤其是最为有效的弱毒疫苗需要一个很长的周期，在这个空白期中间寻找一种合适的方法来进行预防和治疗无疑是必须的。IgY是卵黄中的唯一免疫球蛋白，具有很强的特异性且无毒副作用，最早主要在禽类疾病的治疗和预防中广泛应用，之后又被应用于哺乳动物疫病的防控中，也取得了很好的效果。国内外也已经有很多的研究证明，新生仔猪口服抗PEDV的高免卵黄抗体，能够有效地预防和治疗PEDV感染引起的腹泻，大大提高新生仔猪的存活率。因此，利用口服抗PEDV高免卵黄抗体(IgY)来预防和治疗PEDV引起的感染可能是首选的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrheavirus)变异毒株，通过对S基因和ORF3基因的序列测定及遗传进化分析证明，该毒株为变异毒株，利用该变异毒株制备的高免卵黄抗体能够预防和治疗新生仔猪由于PEDV感染引起的腹泻甚至死亡，大大提高新生仔猪的存活率。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus)变异毒株，猪流行性腹泻病毒命名为HeN2010，保藏编号为CGMCC NO.15799；保藏时间是2018年7月5日；保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明还提供一种上述猪流行性腹泻病毒变异毒株在制备高免卵黄抗体中的应用。

进一步地，所述高免卵黄抗体的制备方法如下：

a.制备猪流行性腹泻病毒变异毒株灭活抗原

1)病毒培养：采用VERO细胞，待细胞生长覆盖率达90％时，选择感染复数为0.1接种病毒，病毒维持液为含0.3％胰蛋白胨磷酸盐肉汤、0.02％酵母提取物和5μg/ml胰酶的1×DMEM培养基，37℃培养，当细胞病变达到80％时收获病毒液，于-70℃和室温反复冻融三次，10000×g离心10分钟，去掉细胞碎片，上清液即为病毒液，冻存于-70℃待用；