[发明专利]利用CRISPR-Cas9系统敲除甘蓝型油菜BnMAX1基因的方法及应用有效
| 申请号： | 201811137314.0 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109266646B | 公开（公告）日： | 2021-03-16 |
| 发明（设计）人： | 王汉中;华玮;郑明;杨红丽;张亮 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 江丽丽;王敏锋 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 crispr cas9 系统 甘蓝 油菜 bnmax1 基因 方法 应用 | ||
1.两种特异性靶向甘蓝型油菜BnMAX1基因的sgRNA，其特征在于，sgRNA-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，sgRNA-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.利用CRISPR-Cas9系统特异性敲除甘蓝型油菜BnMAX1基因的方法，包括如下步骤：
(1)以权利要求1所述的sgRNA为靶序列，分别设计合成正向和反向寡核苷酸序列，退火形成双链，分别制成Oligo二聚体；
(2)将Oligo二聚体分别与Cas9载体连接，获得两种植物表达载体；
(3)通过农杆菌介导的方式将任意一种植物表达载体转化甘蓝型油菜；
(4)在转基因后代中筛选A染色体和C染色体均发生BnMAX1基因突变的植株。
3.根据权利要求2所述的利用CRISPR-Cas9系统特异性敲除甘蓝型油菜BnMAX1基因的方法，其特征在于，根据sgRNA-1设计的寡核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示，根据sgRNA-2设计的寡核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示。
4.根据权利要求2所述的利用CRISPR-Cas9系统特异性敲除甘蓝型油菜BnMAX1基因的方法，其特征在于，步骤(4)中用于检测A染色体中BnMAX1基因突变的引物序列如SEQ IDNO.7-8所示，检测C染色体中BnMAX1基因突变的引物序列如SEQ ID NO.9-10所示。
5.根据权利要求2所述的利用CRISPR-Cas9系统特异性敲除甘蓝型油菜BnMAX1基因的方法，其特征在于，进一步筛选无筛选标记的单株，作为种质资源直接用于育种生产。
6.权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的方法在改良油菜性状中的应用，包括增加油菜分枝数、增加单株角果数、降低油菜高度、增加产量。
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