[发明专利]通过HPLC-MS-MS法同时测定不同品种桂花中7种多酚类活性成分的含量的方法

说明书

本发明提供了一种一种通过HPLC‑MS‑MS法同时测定不同品种桂花中7种多酚类活性成分的含量的方法，属于生化技术领域。用色谱柱Shim‑pack VP‑ODS(2.0×150mm,5μm)，以甲醇‑0.1％甲酸水为流动相，梯度洗脱，体积流量为0.2mL·min‑1，柱温30℃，进样量5μL；质谱采用ESI离子源，多反应监测的负离子扫描方式进行检测，结果7种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系。精密度、重复性和稳定性良好；并符合方法学考察要求。所建立的方法简便，快速，灵敏，专属性强，可用于桂花中绿原酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、柚皮苷、芦丁、阿魏酸和槲皮素7种多酚类活性成分的同时测定。

技术领域

本发明属于生化技术领域，涉及一种通过HPLC-MS-MS法同时测定不同品种桂花中7种多酚类活性成分的含量的方法。

背景技术

酚类化合物是起源于植物中的一类主要次生代谢产物，是天然的植物化学物质。主要来自苯丙氨酸，较少来自酪氨酸，广泛存在于食品和营养品中。酚类化合物结构多样，但可以定义为具有至少一个带有一个或多个芳环羟基物质。根据羟基化芳香族的数量环和功能部分的类型，主要的多酚类有：黄酮类，酚酸类，酚醇类，二苯乙烯类和木脂素类。多酚是人类饮食的重要组成部分，广泛存在于浆果，葡萄/葡萄酒，茶，巧克力/可可，咖啡，大豆和其他水果和蔬菜中。起初，酚类化合物因其强大的抗氧化活性而备受关注。不久之后，在天然食物中发现的酚类对氧化损伤导致的疾病具有潜在的保护作用(例如冠心病，中风和癌症)。最近，越来越多的科学文献表明酚类化合物对癌症具有有效的抑制入侵和转移作用。由于多酚的生理活性与他们的结构相关，详细了解多酚非常重要，重要的是量化植物提取物中的多酚含量，以评估它们对药理活性的影响。

桂花(Osmanthus fragrans Lour.)为木犀科(Oleaceae) 木犀属(Osmanthus)植物，产于中国西南部等地，是我国十大传统名花之一。《本草纲目》中记载:桂花籽，味甘辛，性温，能暖胃、益胃、驱寒。亦有研究报道，桂花具有疏肝理气、祛痰止咳和顺肺开胃的功效。文献研究表明，桂花含酚类、环烯醚萜类、三萜、木脂素类、苯丙素类、苯乙醇类、生物碱类等多种化学成分，因此它具有良好的药用价值。薛阿辉等采用HPLC法从四季桂花醇提液中检测到15种多酚类化合物，利用电喷雾萃取电离质谱分析检测到8种多酚化合物。研究桂花中的酚类化合物，开发新的天然抗氧化剂，对人类健康有极大的益处。

以往的研究多局限在桂花提取分离工艺、性质研究及药理活性方面的研究。并未系统比较桂花中单个多酚类活性成分含量的差异以及在不同品种桂花中的分布情况。目前，对桂花成分的含量测定主要是紫外分光光度法和高效液相色谱法，还未见用液质联用技术分析桂花中多酚类活性成分的国内外文献报道。高效液相色谱串联质谱法通常用于酚类化合物结构特征鉴定。与HPLC-DAD方法相比，HPLC-MS-MS方法具有更高灵敏度、选择性和更高通量定量的优点。

本研究采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS-MS)技术对三个不同桂花品种(丹桂、金桂、银桂)中7种多酚类活性成分的进行结构鉴定，结合标准品质谱对比，确定了桂花中多酚类活性成分的化合组成及含量，为进一步研究桂花的开发和利用提供科学依据。

发明内容

本发明的目的是针对现有的技术存在的上述问题，提供一种通过HPLC-MS-MS法同时测定不同品种桂花中7种多酚类活性成分的含量的方法，本发明所要解决的技术问题是如何简便、快速、灵敏的测定不同桂花中多酚类活性成分的含量。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种通过 HPLC-MS-MS法同时测定不同品种桂花中7种多酚类活性成分的含量的方法，其特征在于，本方法包括如下步骤：

1)、制备供试品溶液：

称取2.5g桂花粉末，加入80％乙醇溶液50mL，称重后，超声提取30min，自然放冷，称重，用浓度为80％的乙醇溶液补足失重，摇匀，过滤；