[发明专利]医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法

说明书

本发明公开了医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法，具体为细胞应用技术领域。制备方法为：胎盘的选择，选择35‑40周新生儿盘状胎盘、一级胎盘；胎盘基蜕膜的分离、将含有庆大霉素的PBS缓冲液反复冲洗胎盘，用眼科剪取胎盘基蜕膜部分到培养皿中；选择超滤膜，将胎盘基蜕膜干细胞裂解液进行膜分离，在‑20℃冷冻储存，医美使用时室温融化。本方法具有易于操作，低免疫反应风险，活性高、效果明显等优点，并且有效利用医院医疗废物，制备成本低廉、可操作性强。突破皮肤吸收屏障，所述的医美级胎盘基蜕膜干细胞内液深度导入到皮下组织部位，迅速被肌肤组织吸收，发挥作用，从而产生疗效。

技术领域

本发明涉及医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法，具体为细胞应用技术领域。

背景技术

胎盘基蜕膜干细胞是一种具有自我复制和多向分化能力的细胞，它们可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞，被医学界称为万用细胞。胎盘基蜕膜干细胞是多能干细胞，是干细胞的一个研究分支，属于非造血成体干细胞，是生物医学研究和组织工程中最常用的种子细胞。此外，胎盘基蜕膜干细胞还具有独特的细胞因子分泌功能，它们分泌的蛋白在组织愈合中发挥重要的作用。胎盘基蜕膜干细胞分泌的蛋白更倾向于在血管生成、细胞的增殖分化、细胞存活率、免疫调节以及胶原的降解方面发挥作用。在胎盘干细胞的条件培养基中，特有的活性蛋白包括成纤维细胞生长因子2(FGF2)、成纤维细胞生长因子7(FGF7)、趋化因子(CCL2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶19(MMP9)。其中，FGF2和FGF7在胚胎发育、细胞存活、细胞分裂、血管生成、细胞分化和细胞迁移的调节中起到重要作用；CCL2是趋化因子，可以吸引单核细胞和嗜碱性粒细胞，并可以增强单核细胞的抗肿瘤活性；MMP1和MMP9分为I，II，III，IV，V，VII和X型胶原酶。

因此,开发胎盘基蜕膜干细胞内液应用于组织再生和修复治疗,可作为一种安全和有效的高科技医美技术和方案。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作过程较为简单，操作容易，适合在医疗医美业和生活医美业中大范围推广的医美方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法具体步骤为：步骤一、胎盘的选择：选择35-40周新生儿盘状胎盘、一级胎盘，采集产妇的外周血，采用ELASA方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、EB病毒、嗜热T细胞病毒为阴性；

步骤二、胎盘基蜕膜的分离，将含有庆大霉素的PBS缓冲液反复冲洗胎盘，用眼科剪取胎盘基蜕膜部分到培养皿中；

步骤三、胎盘基蜕膜干细胞内液的制备，在GMP制备车间中将剪碎的胎盘基蜕膜放到50毫升离心管中，加入3毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶I消化60分钟，加入DMEM/F12培养基终止消化，在2200rpm/min下离心5分钟，弃掉上清，在细胞沉淀中加入20毫升无血清细胞培养基中培养，每3天换液，第7-15天，可观察到梭形细胞长出，7-8个克隆的时候可以传代、冻存；

步骤四、医美级胎盘基蜕膜干细胞内液的制备方法：选择超滤膜，将胎盘基蜕膜干细胞裂解液进行膜分离，在-20℃冷冻储存，医美使用时室温融化。

作为优选，所述的步骤一中的胎盘在无菌状态下取得，并在运输的过程中需要冷链运输，冷冻储存。

作为优选，所述的步骤四中使用的超滤膜选择截留分子量范围在1000～300000的超滤膜。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本医美级胎盘基蜕膜干细胞内液制备方法具有易于操作，低免疫反应风险，活性高、效果明显等优点，并且能有效利用医院医疗废物，且制备成本低廉、可操作性强。突破皮肤吸收屏障，所述的医美级胎盘基蜕膜干细胞内液深度导入到皮下组织部位，迅速被肌肤组织吸收，发挥作用，从而产生疗效。还能够准确地直接到达真皮层，同时又没有创伤，因此具有准确、安全、高效、适应证广、并发症无等优点，现已成为美容行业的首选产品。