[发明专利]一种检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。该试纸条包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合物释放垫上包埋有荧光微球标记的异菌脲单克隆抗体，硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，检测区喷涂有异菌脲半抗原‑载体蛋白偶联物，质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体，异菌脲半抗原是由3,5‑二氯苯异氰酸酯与甘氨酸乙酯盐酸盐、6‑氨基己酸甲酯盐酸盐等经过一系列反应得到。本发明提供的试纸条和检测方法具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低的优点，能实现对大批量样品中异菌脲的快速检测。

技术领域

本发明属于农药残留检测领域，具体涉及一种检测烟草及烟草制品中异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

异菌脲（Iprodione）属于二甲酰亚胺类，是一种广谱性触杀型保护性杀菌剂，广泛应用于烟草、果树、蔬菜的病害防治和水果的贮藏保鲜。异菌脲可以通过根部吸收起内吸作用，可有效防治对苯并咪唑类内吸杀菌剂有抗性的真菌。其主要防治对象为由葡萄孢菌、交链孢菌、核盘菌等引起的病害，如灰霉病、早疫病、黑斑病、菌核病等。我国针对不同作物，制定了异菌脲的最大残留限量标准，其中在油菜籽、黄瓜中的最大残留限量为2 mg/kg，在番茄、苹果、梨中的最大残留限量为5 mg/kg，在葡萄、香蕉中的最大残留限量为10 mg/kg。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中异菌脲的指导性残留限量为0.5 mg/kg，我国尚未制定异菌脲的最大残留限量，在实际生产中，以0.5 mg/kg作为烟草最大残留量判定标准。

目前，常用检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。由于以上方法均需先进检测仪器、检测费用昂贵、步骤繁琐、耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层企事业单位的高通量快速筛查检测。因此，开发一种不受检测设备限制、能实现大批量样品快速检测的产品和方法正是本发明要解决的问题。

荧光免疫层析技术是在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它是免疫亲和技术、免疫标记技术、免疫层析技术的结合，具有快速、操作简便等优点。相比传统标记物，荧光微球的发光强度可以随激发光的强度增强而增强，所以荧光微球标记有望提高免疫层析技术的检测限；而在微球壳结构的作用下，荧光微球具有相对稳定的形态结构，粒度均一、单分散性好、稳定性好、发光效率高、重复性好，有较好的生物相容性；形成微球后染料荧光猝灭大大减少，发射强而稳定，且基本不受外界环境介质变化的影响。因此相比上述检测方法，荧光微球免疫层析技术同时具有检测灵敏度高、操作简便、稳定性好的优点。目前尚无用于检测烟草及烟草制品中异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种灵敏度高、操作简便、检测快速、价格低廉的检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条；本发明的另一个目的是提供上述试纸条的制备方法；本发明的再一个目的是提供上述试纸条在检测异菌脲中的应用。

为了实现上述目的，本发明采取的一个技术方案是：

提供一种检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条，它包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合物释放垫上包埋有荧光微球标记的异菌脲单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有异菌脲半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体。