[发明专利]一种检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条，包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于所述结合物释放垫上包埋有荧光微球标记的异菌脲单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有异菌脲半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体；所述异菌脲单克隆抗体是以异菌脲半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述异菌脲半抗原-载体蛋白偶联物是由异菌脲半抗原与载体蛋白偶联得到，所述异菌脲半抗原是由3,5-二氯苯异氰酸酯与甘氨酸乙酯盐酸盐反应生成2-(3-(1,5-二氯苯基脲基))乙酸乙酯，水解得到2-(3-(1,5-二氯苯基脲基))乙酸，再经过成环反应，得到3-(3,5-二氯苯基)-2,4-咪唑烷基二酮，再与6-氨基己酸甲酯盐酸盐与三光气反应得到的6-异氰酸基己酸甲酯反应生成6-(3-(3,5-二氯苯基)-2,4-二氧咪唑烷基-1-甲酰胺基)己酸甲酯，最后在酸性条件下水解得到，其分子结构式为：

，

所述异菌脲半抗原的制备反应过程如下：

。

2.根据权利要求1所述的检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述荧光微球是直径为100~300nm的用聚苯乙烯包裹荧光物质的微球，其表面连接有—COOH基团。

3.根据权利要求2所述的检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述荧光物质为镧系元素。

4.根据权利要求1所述的检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述载体蛋白为甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。

5.一种权利要求1-4任一所述的检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）结合物释放垫的制备：用荧光微球标记异菌脲单克隆抗体，并将其以特定缓冲体系稀释后，将结合物释放垫浸泡于稀释缓冲液中，经真空冷冻干燥后制备；

2）硝酸纤维素膜的制备：将异菌脲半抗原-载体蛋白偶联物喷涂到硝酸纤维素膜上的检测区范围，制成检测区；将羊抗鼠抗抗体喷涂到硝酸纤维素膜上的质控区范围，制成质控区；

3）组装和剪切：在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、包埋有荧光微球标记异菌脲单克隆抗体的结合物释放垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜及吸水垫，并剪切成所需的宽度即为时间分辨荧光免疫层析试纸条。

6.一种权利要求1-4任一所述的检测异菌脲的时间分辨荧光免疫层析试纸条的应用，其特征在于包括以下步骤：

1）样品前处理；

2）用所述试纸条进行检测；

3）用荧光检测仪分析检测结果。