[发明专利]一种重组传染性造血器官坏死病毒及其构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种重组传染性造血器官坏死病毒及其构建方法与应用。本发明所提供的重组传染性造血器官坏死病毒与改造前的传染性造血器官坏死病毒相比，差别仅在于在所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的P基因和M基因之间还含有目的蛋白的编码基因(如传染性胰脏坏死病毒的VP2基因)。本发明以IHNV为亲本病毒，利用反向遗传操作技术体外拯救成功获得了能够表达传染性胰脏坏死病毒VP2基因的重组病毒rIHNV‑VP2。本发明所构建得到的重组病毒rIHNV‑VP2，通过系列试验证明了该重组病毒能够起到同时防治IHNV和IPNV的作用，本发明为进一步开展IHNV和IPNV的防治研究奠定了坚实的基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种重组传染性造血器官坏死病毒及其构建方法与应用。

背景技术

传染性造血器官坏死病(Infectious hematopoietic necrosis,IHN)和传染性胰脏坏死病(Infectious pancreatic necrosis,IPN)是最常见的、严重危害鲑鳟鱼健康的病毒性传染病，是目前造成世界范围内鲑鳟鱼产业重大经济损失的最主要的两种疾病。传染性造血器官坏死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus，IHNV)，属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)，诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus)，为单股负链RNA病毒，其病毒基因组全长约为11kb，包含六个基因，分别编码病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)、非结构蛋白(NV)和聚合酶蛋白(L)。根据G蛋白基因序列可将世界范围内的IHNV分为U、M、L、E和J五种基因型。其中，U、M、L基因型主要流行于北美，E基因型流行于欧洲，J基因型流行于亚洲。根据致病毒株、环境因素、鱼龄的不同，IHNV可造成鲑鳟鱼高达100％的死亡率，是目前严重阻碍鲑鳟鱼健康可持续发展的头号杀手。传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)属于双片段RNA病毒科的水生双RNA病毒属。IPNV基因组由两条双链RNA组成(A片段和B片段)，A片段全长3092bp，编码106kDa多聚蛋白(NH2-VP2-VP4-VP3-COOH)，其中VP2和VP3是该病毒的两种主要结构蛋白，VP2是诱导保护性中和抗体的主要免疫原。B片段全长2777bp，编码蛋白pVP1(94kDa)，是病毒粒子依赖的RNA聚合酶。由于毒株、宿主及环境因素的不同，IPNV可造成10％～90％死亡率。IHN和IPN主要危害鱼苗和幼鱼阶段的虹鳟(Onchorhyncus mykiss)、美洲红点鲑(Salvelinusfontinalis)、褐鳟(Salmo trutta)、大西洋鲑(Salmo salar)和大麻哈属(Oncorhynchusspp.)的鱼苗及幼鱼，是目前严重阻碍鲑鳟鱼健康可持续发展的主要病毒性传染病。

与经典的从表型改变到进行基因特征研究的思路相反，反向遗传操作技术(reverse genetics)是指通过构建RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒cDNA分子水平上对其进行体外人工操作(如进行基因点突变、缺失、插入、颠换、转位和互补等改造)，改变病毒的某些特征(如减低病毒的毒力，提高病毒的侵染力等等)，将病毒的cDNA分子连入表达载体，转染细胞获得病毒的感染性克隆，也被称为“病毒拯救”(the rescue of virus)。通过反向遗传操作技术可以研究RNA病毒的基因复制与表达调控机理、RNA编辑和自发重组与诱导重组、病毒与宿主间的相互作用关系、抗病毒策略、基因治疗研究，以及构建新型病毒载体来表达外源基因和进行疫苗的研制等。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组传染性造血器官坏死病毒及其构建方法与应用。

第一方面，本发明要求保护一种重组传染性造血器官坏死病毒。

本发明所提供的重组传染性造血器官坏死病毒与改造前的传染性造血器官坏死病毒相比，差别仅在于在所述改造前的传染性造血器官坏死病毒的基因组RNA中的P基因和M基因之间还含有目的蛋白的编码基因。