[发明专利]鸡新城疫病毒的融合蛋白及其制备方法、应用和疫苗

说明书

本发明提供了一种鸡新城疫病毒的融合蛋白及其制备方法、应用和疫苗，涉及生物技术领域。该融合蛋白将鸡新城疫病毒F基因和HN基因序列进行串联，表达的融合蛋白具有抗原性好，表达量高的优点。该融合蛋白可应用于制备疫苗、抗体和用于检测鸡新城疫病毒的试剂盒。包含该融合蛋白的疫苗具有较好的免疫原性，该疫苗14日即可测定HI抗体几何平均滴度(GMT)均不低于1:64，而常规的灭活苗免疫后21日HI抗体几何平均滴度(GMT)不低于1:64，缩短断了疫苗免疫的空窗期，降低了生产成本低。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种鸡新城疫病毒的融合蛋白及其制备方法、应用和疫苗。

背景技术

鸡新城疫(new castle disease，ND)是鸡新城疫病毒导致的禽类急性、接触性传染病，鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)，基因组为单股负链不分节的RNA。鸡新城疫病毒主要能导致鸡败血症，容易出现下痢、呼吸困难、神经紊乱、浆膜与粘膜出血。该病的致死率高，严重威胁禽类养殖，属烈性传染病。在鸡新城疫的防治方面，已经投入了大量的人力、物力与财力来研究鸡新城疫的防止措施。

目前鸡新城疫疫苗主要采用的是灭活疫苗、弱毒疫苗、基因工程苗等，其中灭活疫苗和弱毒疫苗具有生产工艺复杂、免疫保护力弱和生产成本高的缺点，逐步被基因工程疫苗所替代。现在常用的鸡新城疫基因工程苗多采用杆状病毒表达HN蛋白或F蛋白制备疫苗，虽然该疫苗安全稳定，但表达产物的抗体滴度低，影响了其实际应用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种鸡新城疫病毒的融合蛋白，该融合蛋白将及鸡新城疫病毒的F蛋白和HN蛋白进行串联表达。

本发明的第二目的在于提供一种上述融合蛋白的制备方法，该制备方可以表达上述融合蛋白。

本发明的第三目的在于提供一种上述融合蛋白或上述制备方法制备得到的蛋白的应用，可应用于制备疫苗、抗体和病毒检测等多个方面。

本发明的第四目的在于提供一种包含上述融合蛋白的疫苗，该疫苗免疫原性好，保护效力高。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

一种鸡新城疫病毒的融合蛋白，包括F区段和HN区段；所述F区段主要由SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列表达，所述HN区段主要由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表达。

优选地，F区段和HN区段的排列顺序为F-HN，通过Linker连接；

优选地，所述Linker具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

优选地，所述融合蛋白具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

本发明还提供了一种上述融合蛋白的制备方法，将所述融合蛋白的基因在宿主中表达；

优选地，使用哺乳动物表达系统表达所述融合蛋白的基因；

优选地，使用CHO细胞表达系统表达所述融合蛋白的基因。

优选地，提供包含表达所述融合蛋白的基因的表达载体，将所述表达载体导入CHO细胞中，然后对CHO细胞进行加压筛选，再将加压筛选出的CHO细胞驯化成悬浮培养的细胞株，使所述悬浮培养的细胞株表达所述融合蛋白。

优选地，使用谷氨酰胺合成酶筛选扩增系统加压筛选表达所述融合蛋白的CHO细胞株；

优选地，所述CHO细胞表达系统使用的表达载体包括pcDNA3、pEE6.4、pEE12.4或pGL4.13。