[发明专利]一种烟草土壤戴氏菌及其分离方法和应用

说明书

本发明提供了一种烟草土壤戴氏菌及其分离方法和应用，该细菌的微生物学分类命名为烟草土壤戴氏菌Dyellatabacisoli L4‑6，已于2018年6月19日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC 1.16273。本发明从土壤中分离得到的烟草土壤戴氏菌L4‑6，可用于对香原料植物进行发酵，所得到的发酵产物具有提高香原料植物提取物品质的作用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种烟草土壤戴氏菌及其分离方法和应用。

背景技术

加香加料是卷烟工艺中的关键环节，是完善产品风格的决定性因素和提高卷烟香气质量的有效手段之一。目前，烟用香料按来源分为三类，即来自非烟草的天然植物香精油、浸膏等；来自非烟草的天然植物香料，如从各种植物的花、果实、根、茎、叶中提取的精油浸膏、酊剂等；人工合成的香料，如醇、醛、酮等单体香料。按香料生产方法的不同主要分为两种，即采用各种分离手段直接从烟草或其它植物中提取的天然香料和采用化学反应合成的香料。目前，这两种方法都有其优点，但均存在一定的局限性。如直接从植物中提取天然香料，虽然生产操作简单，但存在改善卷烟抽吸效果不明显等缺点；采用化学合成的香料，虽然生产过程易于控制，但也存在香气单调、不自然等缺点。

近年来，随着微生物技术日新月异的发展，微生物法生产香料的工作已取得了很多进展。微生物种类丰富，长期以来人们利用纯培养技术对环境中的微生物进行调研和开发利用，微生物资源在科技研究及生物产业中的重要性也日益凸显。世界上许多国家都在搜集、保存各种微生物资源，微生物资源的不断丰富将为我国生物技术的发展奠定坚实的物质基础。

利用微生物对香原料进行发酵，可以增加传统提取香原料中多种香气物质的含量，提升香气丰富性。产香微生物，即能够产生具有芳香气味物质的微生物。目前，已经得到应用的产香微生物主要包括生香活性干酵母(生香ADY)、假丝酵母、乳酸菌、黑曲霉等。但是应用到卷烟中的微生物还很少，而且增香效果也不太理想。

发明内容

*除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明第一方面涉及一种具有产香功能的微生物烟草土壤戴氏菌L4-6，其是从云南昆明烟草种植基地烟草土壤样品中分离得到的，对其进行了形态学、生理生化性质和16SrDNA分析，鉴定结果表明其属于烟草土壤戴氏菌，微生物学分类命名为烟草土壤戴氏菌Dyellatabacisoli L4-6，已于2018年6月19日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC 1.16273，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。

本发明分离得到的烟草土壤戴氏菌L4-6菌株的主要形态特征和生理生化性质特征为：在大多数培养基上生长良好，在R2A琼脂培养基上，菌落边缘整齐，中间凸起，呈黄色。明胶液化，氧化酶、过氧化氢酶、吐温20，40，60和80 水解呈阳性，淀粉水解、纤维素水解，酪蛋白水解呈阴性，不产生硫化氢，不产生黑色素。能利用麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、乳糖、甘露糖、甘油、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸。细胞膜的极性脂成分主要包括磷脂酰甘油、双磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺，细胞的呼吸醌为泛醌-8(Q-8)。

本发明所分离得到的烟草土壤戴氏菌L4-6的16S rDNA基因核苷酸序列如序列表所示，该序列已递交国际核苷酸序列数据库(GenBank)，序列检索号： MF370623。

本发明第二方面涉及一种分离、培养和鉴别如本发明第一方面所述的烟草土壤戴氏菌L4-6的方法，包括以下步骤：

a、从自然环境中取土壤样品，加无菌水，摇床振荡，加无菌水继续稀释并涂布于LB平板培养基上进行培养，挑选单菌落，纯化，得到分离的微生物菌液，加入甘油、置于冰箱中备用；

b、将步骤a分离的微生物菌液接种到LB液体培养基中，摇床振荡，培养至菌液浓度为光密度OD＝2.0，制得种子液；