[发明专利]一种将人造血祖细胞转变为造血干细胞的方法

说明书

本发明公开了一种利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法，包括以下步骤：S1从人脐带血获取CD34+CD90‑和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞；S2所述CD34+CD90‑和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞悬浮接种于脐带血造血干细胞专用转化培养基中培养，所述脐带血造血干细胞专用转化培养基采用StemSpan SFEM II无血清培养基，添加100ng/ml SCF，100ng/ml FLT3，50ng/ml TPO；24孔板中细胞接种密度为：CD34+CD90‑细胞为0.55x10⁴/孔，CD34+CD45RA+细胞为0.13x10^4/孔；添加MS‑275 1μM；置于37℃,5％CO₂培养箱培养。本发明的有益效果：利用人造血祖细胞制备的造血干细胞数量高，且具备各谱系分化潜能，能够为临床应用提供造血干细胞供体。

技术领域

本发明涉及造血干细胞技术领域，特别涉及利用化学小分子由人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法。

背景技术

造血干细胞是成体内极其重要的一类干细胞，尽管其仅占人体血细胞比例不到万分之一，但具备极强的自我更新能力和分化能力，能长期重建机体整个血液系统和免疫系统，具备各世系血细胞和免疫细胞的分化潜能。因此，造血干细胞被广泛应用于白血病、淋巴瘤等恶性血液疾病的临床治疗。不仅如此，造血干细胞移植还能帮助治疗代谢性疾病、先天性免疫缺陷、糖尿病等病症。据统计，每年全世界有超过40，000例造血干细胞移植手术。目前，造血干细胞的供体主要来源于患者自体或者与患者HLA匹配的捐献者的骨髓和动员的外周血造血干细胞。尽管该移植技术疗效很好，但由于其存在HLA配型的严格配对要求，仍有大约70％的患者不能获得合适的供体而无法接受治疗；即使接受了治疗，多数患者也会经受程度各异的移植物抗宿主病(GVHD)的折磨。脐带血造血干细胞对于HLA配型的要求相对较低，且免疫原性低，再加上其获取方便、来源丰富，逐渐成为造血干细胞移植供体的一大来源。然而由于单份脐带血所含造血干细胞数量少，不足以短时间内重建成人患者的免疫系统，从而增高机会性感染致死率，急需一种增加脐带血造血干细胞数量的方法。

造血祖细胞是一类自我更新能力和分化潜能低于造血干细胞的细胞类型，虽然表达CD34表面抗原，但不表达造血干细胞特异的CD90表面分子，而为CD45RA阳性。因此，可以利用CD90和CD45RA区分造血干细胞和造血祖细胞。造血祖细胞具备短期(不到一个月)的体内移植能力，能分化为红细胞、淋巴细胞、髓系细胞等多种血液细胞。由于其不具备长期移植重建受体血液系统的能力，常常被排除在血液细胞移植治疗恶性血液病的手术之外。但造血祖细胞体内含量远远高于造血干细胞(0.03％vs0.0001％)，若能够将造血祖细胞转变为造血干细胞，则将大大拓宽造血干细胞的供体来源。

恩替诺特(Entinostat，MS-275)是HDAC1抑制剂，过去的研究表明Entinostat(MS-275)作用于HCT-15的人类移植瘤显示出强抗癌活性。Entinostat(MS-275)和IL-2联用，作用于肾细胞癌显示出强抗癌活性，因为其可以降低调节性T细胞数量。近年来文献报道HDAC1抑制剂在造血干细胞体外扩增中发挥重要作用。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提供了一种利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法，包括以下步骤：

S1从人脐带血获取CD34+CD90-和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞；