[发明专利]一种外泌体冻干粉的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，将混合液依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，得到外泌体冻干粉，所得外泌体冻干粉蛋白活性可以保持90％以上，可冷藏或是室温保存1~2年，整个生产周期仅需要15~25小时，极大改善保存条件的要求同时便于运输；本发明一种外泌体冻干粉的应用，在促血管形成、促进细胞新生及免疫调节方面有重要作用；将外泌体冻干粉应用在美容行业，有效与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞的营养代谢，减少皮肤受到紫外线、自由基等侵害，减少黑色素的生成，促使真皮层胶原细胞的增生，具有抚平细纹，延缓皮肤老化、美白肌肤的效果。

技术领域

本发明属于生物医药制备技术领域，具体涉及一种外泌体冻干粉的制备方法及其应用。

背景技术

外泌体（exosome，Exo）是细胞向胞外分泌的囊泡类小体，直径为30nm~150nm，具有典型的脂质双分子层膜结构，存在于细胞培养上清液、 血浆、血清、唾液、尿液、羊水其它生物体液中，在机体多种生理病理过程中发挥重要作用，是近些年来生物医学领域研究的热点问题。目前干细胞广泛应用于组织修复等领域。与干细胞比较，作为其旁分泌物的干细胞外泌体具有更稳定的生物特性，有研究表明外泌体在-80℃保存2年仍能保持其生物学功能。近期研究发现，干细胞来源的外泌体可以有效转运mRNA、micro RNA及蛋白质等生物活性物质，具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能，在调控组织再生方面存在良好的临床应用前景，目前国内鲜有将外泌体应用在生物美容领域。

外泌体提取液以液态形式保存的保质期非常短，而且保存条件非常苛刻，一般在4℃下只能保存2天左右，-20℃冷冻的条件下也只能保存半年左右，极大地限制了外泌体的应用。因此，如何方便的保存外泌体，且保持其生物活性及稳定性，同时也方便运输是亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体制成冻干粉，提高外泌体的生物活性及稳定性，能够在冷藏或者常温下保存较长时间，且方便运输；

本发明的目的之二在于提供一种外泌体冻干粉的应用，将外泌体冻干粉应用在美容行业，实现美白、抗衰的效果。

本发明所采用的技术方案是，一种外泌体冻干粉的制备方法，将外泌体提取液、保护剂、添加剂和超纯水混合，搅拌均匀，得到混合液，将混合液依次经过预冻、加强预冻、预抽真空、升华干燥和解析干燥处理，得到外泌体冻干粉。

本发明的特点还在于：

混合液由以下重量份数的组分制成：外泌体提取液40~50份、保护剂8~10 份、添加剂0~2份和超纯水38~52份。

保护剂为多元醇；所述添加剂为聚合物、糖中的至少一种。

多元醇为山梨醇、甘露醇中的至少一种。

聚合物为右旋糖苷、聚乙二醇中的至少一种；所述糖为乳糖、海藻糖中的至少一种。

预冻的温度为-40~-50℃，冷冻时间为2~3h。

加强预冻的温度为-40~-50℃，冷冻时间为1~2h。

预抽真空温度为-40~-50℃，时间为0.5~1h真空度为15Pa。

升华干燥包含三个阶段，其中，

第一阶段的温度为-15℃~-10℃，时间为 6~8h，真空度为15Pa；

第二阶段的温度为-5℃~0℃，时间为1~3h，真空度为5Pa；

第三阶段的温度为0℃~10℃，时间为1~2h，真空度为0.1Pa；

解析干燥的温度为30℃~40℃，时间为3~6h，真空度为20Pa。