[发明专利]一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种Ag@Pt‑CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用。本发明使用Au NPs@MWCNTs‑SO₃H作为基底材料，同时利用Ag@Pt纳米粒子负载氨基化的CuS微球与检测抗体孵化作为信号标记以增强免疫传感器的催化性能，成功构建了Ag@Pt‑CuS标记的免疫传感器，从而实现了对肿瘤标志物CEA、AFP的检测，具备检测限低，灵敏度高，特异性强等优势，对肿瘤的早期检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，涉及一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用Ag@Pt-CuS为检测抗体标记物，实现了对肿瘤标志物CEA、AFP的灵敏检测。

背景技术

肿瘤是从正常的细胞转化而来的异质增生细胞，可在人体的多个器官和组织出现，在早期的时候不易被人们察觉，由于肿瘤的生长和转移速度极快，当人们察觉时往往为时已晚，这严重损害人们的健康并且危及生命。开发一种灵敏检测相关生物标志物对许多的生物医学和诊断研究方面至关重要。目前来说，肿瘤标志物检测的方法有很多种，如酶联免疫吸附剂测定，荧光免疫分析，放射免疫法等，除了这些技术，电化学免疫传感器由于其灵敏性高、检测限低、检测速度快、操作简便而受到了广泛的关注。

电化学免疫传感器是将免疫分析技术和生物传感技术相结合，用于测量电流、电位的变化来进行分析的。电化学免疫传感器是抗原抗体特异性结合所引起的电化学信号变化反映的，一般分为有标记型免疫传感器和无标记型免疫传感器。有标记型免疫传感器具有灵敏度高、检测限低、特异性高等优点，已广泛应用于多种领域。

Au NPs@MWCNTs-SO₃H作为基底材料，不仅可以增大免疫传感器的比表面积而且可以发挥多壁碳纳米管导电性强的特点，提高电极的导电性，其中Au NPs是一种生物亲和性的材料可以结合更多的抗体，同时Au NPs导电性也非常好，可以加快电子的转移和传输。Ag@Pt-CuS作为检测抗体标记物，可以增加免疫传感器的灵敏度并提高其催化性能。CuS作为过渡金属硫化物半导体，具有良好的生物相容性，高电子传输性能和良好的导电性。Ag@Pt纳米粒子具有很强的催化性能，可以进一步提高免疫传感器的灵敏度。本发明采用金纳米粒子负载磺化的多壁碳纳米管作为基底材料，Ag@Pt-CuS作为检测抗体标记物构建的标记型免疫传感器，实现了对肿瘤标志物CEA的检测，具有检测限低，灵敏度高，重复性、选择性和稳定性好等优点，在临床应用中实现了对肿瘤标志物的精确检测。

发明内容

本发明提供了一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用，实现了对肿瘤标志物的灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器应用于肿瘤标志物的高灵敏、特异性检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1.一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨成镜面，超纯水清洗干净；

（2）将6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的Au NPs@MWCNTs-SO₃H溶液滴涂于上述电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL、质量分数为1%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面的非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，除去未结合的BSA，4 °C冰箱中晾干；