[发明专利]一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨成镜面，超纯水清洗干净；

（2）将6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的Au NPs@MWCNTs-SO₃H溶液滴涂于上述电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL、质量分数为1%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面的非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，除去未结合的BSA，4°C冰箱中晾干；

（5）继续滴加6 µL、10 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；

（6）继续滴加6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL的检测抗体孵化物Ag@Pt-CuS-Ab₂溶液于电极表面，置于4 °C冰箱中孵化40 min，超纯水冲洗、晾干，制得一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器；

所述检测抗体孵化物Ag@Pt-CuS-Ab₂溶液的制备，步骤如下：

（a）Ag@Pt纳米粒子的制备

搅拌状态下，将0.05 ~ 0.15 mL、1 mol·L^-1的KOH，2 ~ 4 mL、0.01 mol/L的抗坏血酸和0.05 g的PVP加入到2 mL的超纯水中，然后将4 mL、0.002 mol/L的AgNO₃逐滴加入到上述溶液中，随后继续滴加4 mL、0.002 mol/L的H₂PtCl₆，60 °C下搅拌1 h，产物用体积比为1:1的无水乙醇超纯水混合液离心洗涤三次，超声分散于5 mL超纯水中制得Ag@Pt纳米粒子分散液备用；

（b）CuS微球的制备

室温下，将1 g PVP溶于40 mL超纯水中，后加入0.5 g Cu(NO₃)▪3H₂O混合，继续依次加入20 ~ 40 mL乙二醇和0.2 ~ 0.4 g硫脲，连续搅拌1 h后，将产物转移至三口烧瓶中，搅拌状态下160 °C回流2 h，得到黑色悬浮液，自然冷却至室温，离心，无水乙醇洗涤三次，在60°C真空干燥箱干燥8 ~ 12 h，制得CuS微球；

（c）Ag@Pt-CuS的制备

将0.1 g CuS微球和0.1 ~ 0.3 mL APTES依次加入到5 ~ 15 mL无水乙醇中，油浴锅中加热至90 °C并保持回流1 ~ 3 h；冷却至室温，离心，无水乙醇和超纯水洗涤三次，50 °C真空干燥箱中干燥制得氨基化的CuS微球；

将3 mg氨基化CuS微球加入到3 mL Ag@Pt纳米粒子分散液中，超声1 h，离心，用无水乙醇洗涤三次，50 °C真空干燥箱中干燥12 h；

（d）检测抗体孵化物Ag@Pt-CuS-Ab₂溶液的制备

将1 ~ 3 mL、2 mg/mL的Ag@Pt-CuS分散液加入到0.5 ~ 1.5 mL、10 μg/mL的肿瘤标记物检测抗体Ab₂溶液中，恒温振荡箱中震荡孵化12 h；离心分离，重新分散至1 ~ 3 mL的pH=7.38的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物Ag@Pt-CuS-Ab₂溶液，4 °C保存备用。