[发明专利]一种构建链特异RNA文库的方法及应用有效
| 申请号： | 201811055627.1 | 申请日： | 2018-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN109234813B | 公开（公告）日： | 2021-11-16 |
| 发明（设计）人： | 卢文翔;王莹;涂慧珍;白云飞;顾万君;朱毅华;郑卫国 | 申请（专利权）人： | 南京迪康金诺生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6869;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 蓝霞 |
| 地址： | 211102 江苏省南京市江宁*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 特异 rna 文库 方法 应用 | ||
1.一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：将RNA片段化处理得到片段化的RNA，将片段化的RNA逆转录后采用RNase H消化RNA/DNA杂合体，消化产物与接头连接得到连接产物，连接产物进行PCR扩增，扩增产物即为链特异RNA文库。
2.根据权利要求1所述的一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，所述RNA为total RNA、mRNA或lncRNA。
3.根据权利要求1所述的一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，所述接头的一端含有随机碱基N，所述随机碱基N的个数为3-6个。
4.根据权利要求1所述的一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，所述片段化处理中加入片段化缓冲液，所述片段化缓冲液为Mg2+缓冲液。
5.根据权利要求1所述的一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，消化RNA/DNA杂合体反应中还加入BSA溶液，所述BSA溶液为0.1％BSA溶液。
6.根据权利要求1所述的一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，消化产物与接头连接的连接体系中包括T4DNA连接酶、接头和缓冲液。
7.根据权利要求4所述的一种构建链特异RNA文库的方法，其特征在于，所述Mg2+缓冲液包括15mM MgCl2、250mM pH8的Tris-HCl、300mM KCl、1mM DTT和10mM随机引物。
8.权利要求1所述的一种构建链特异RNA文库的方法应用于高通量RNA测序文库构建方面。
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